检测试剂盒反向斑点杂交法.pdfVIP

人乳头瘤病毒基因分型（ 32 型）检测试剂盒使用说明书 （PCR- 反向斑点杂交法） 【产品名称】 通用名称：人乳头瘤病毒基因分型（ 32 型）检测试剂盒（ PCR-反向斑点杂交法） 英文名称： Human Papillomavirus Genotyping Kit For 32 Types （PCR-RDB ） 【包装规格】25 人份/盒 【预期用途】本试剂盒用于检测宫颈脱落细胞是否感染人乳头瘤病毒（ Human papillomavirus ，HPV ）并加以分型，对宫颈癌的早期诊断有重要意义。 【检测原理】反向斑点杂交法 本试剂根据 HPV 基因组的特点设计生物素标记的引物， PCR 扩增各基因 型 HPV 的目的片段。将 32 型 HPV 特异性寡核苷酸探针固定在尼龙膜上。根据 生物素 -亲和素系统（ Biotin-avidin system,BAS）原理，将 PCR 扩增产物与固化 在膜条上的探针杂交，洗膜后加入辣根过氧化合物酶标记的亲和素（ POD），与 PCR 产物上的生物素结合。加入显色液（ TMB ，H2O2 ），辣根过氧化物酶催化其 底物 H2O2 分解，TMB 作为供氢体参与反应后产生蓝色的斑点。 根据杂交信号斑 点的有无来判断样本中是否存在 HPV 的基因型。 本试剂盒能有效检测 WHO 确认的 32 种 HPV 的基因型，其中包括 19 种高 危亚型： HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、 68、73、82、83 型； 13 种低危亚型 :HPV6、11、40、42、43 、44、55、61、67、 69、70、72、81 型。 【主要组成成分】 组成成分 规格 数量 PCR 反应液 20 μL/ 管 25 管 核酸扩增组分 阴性质控品 10 μL 1 管 阳性质控品 10 μL 1 管 裂解液 2.5mL 2 管 POD 75 μL 1 管 杂交组分 30% H 2O2 75 μL 1 管 TMB 10mL 1 瓶 膜条 - 25 张 【自备试剂】 1、20 ×SSC:称取 175.3gNaCl 和 88.2g 枸橼酸钠二水，用 800mL 双蒸水溶解，浓 HCl 调节 pH 值至 7.0，定容至 1000mL，高压灭菌，室温保存。 2、10%SDS:将 20gSDS 溶解在 180mL 双蒸水中， 浓 HCl 调节 pH 值至 7.0，定容 至 200mL ，高压灭菌，室温保存。 3、1M 柠檬酸钠：294.1g 柠檬酸钠加纯水 800mL 溶解，用浓 HCl 调 pH 值至 5.0， 定容至 1000mL，室温保存。 4 、A 液： (2 ×洗膜缓冲液 )将 100mL 20 ×SSC，10mL 10%SDS 用双蒸水定容到 1000mL。 5、B