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第三章 发酵工艺条件的确定;一、发酵生产中的培养基类型 ;1．斜面培养基;2.种子培养基(包括摇瓶种子和小罐种子培养基);种子培养基特点： 1. 必须有较完全和丰富的营养物质，特别需要充足的氮源和生长因子。 2. 种子培养基成分还应考虑与发酵培养基的主要成分相近。;;3.发酵培养基; 注意代谢调节物的影响 有些物质存在于培养基中往往能明显地促进或抑制发酵产物的形成。 前体物质 诱导剂 阻遏物 抑制剂 金属离子;(1)添加前体物质;青霉素：分子量356;用法：流加，利于提高转???率 前体一般都有毒性，浓度过大对菌体的生长不利 苯乙酸，一般基础料中仅仅添加0.07% 前体相对价格较高，添加过多，容易引起挥发和氧化。;(2)添加诱导物;(3)注意阻遏物或抑制剂的影响; (4) 金属离子的影响 有些种类的发酵生产对金属离子相当敏感，因为有些金属离子是中间代谢酶抑制剂或激活剂。 对于有重大影响的金属离子必须严格控制。如柠檬酸发酵中铁、锰和锌离子都能明显影响产量，钙离子对细菌淀粉酶的生产有促进作用，而钴离子对葡萄糖异构酶的发酵是必需的。;二、培养基组成;碳源种类 糖：己糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖，多糖中淀粉、纤维素、半纤维素、甲壳质和果胶质等。 有机酸如柠檬酸、反丁烯二酸、琥珀酸、苹果酸、丙酮酸、酒石酸等。;醇类中甘露醇、甘油、低浓度的乙醇。 脂肪酸如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸等低级脂肪酸都可用作碳源。油酸和亚油酸等高级脂肪酸可被不少放线菌和真菌作为碳源和能源利用，低浓度的高级脂肪酸可刺激细菌生长，但浓度较高时往往有毒害作用。 正烷烃;葡萄糖： 是最易利用的糖，并且作为加速微生物生长的一种有效的糖。 过多葡萄糖会加速菌体的呼吸，以致培养基中的溶解氧不能满足需要。 油和脂肪： 在微生物分泌的脂肪酶作用下水解为甘油和脂肪酸，在溶解氧的参与下，氧化成水和CO2。因此用脂肪作碳源时需比糖代谢供给更多的氧。;淀粉：一般要经菌体产生胞外酶水解成单糖后再被吸收利用。可克服葡萄糖代谢过快的弊病。来源丰富，价格低廉。常用的为玉米淀粉、小麦淀粉和甘薯淀粉。 糖蜜：是制糖厂生产糖时的结晶母液，含有较丰富的糖、含氮化合物和维生素等。;例：地衣芽孢杆菌生产α-淀粉酶;糖蜜使用的注意点：;氮的来源可分为无机氮和有机氮 有机氮源：花生饼粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母膏、鱼粉、蚕蛹粉、尿素、废菌丝体和酒糟等。 它们在微生物分泌的蛋白酶作用下，水解成氨基酸，被菌体进一步分解代谢。;玉米浆：玉米淀粉生产中副产物，其中固体物含量在50％。还含有有机酸、还原糖、磷、微量元素、生长素等。 由于玉米浆的来源不同，加工条件也不同，因此玉米浆的成分有较大波动。;无机氮源：铵盐、硝酸盐、氨水等。 微生物对其吸收利用比有机物快，所以也称速效氮。 利用无机氮时应注意引起的pH变化。 实验室中常用蛋白胨、牛肉膏、酵母膏等作为氮源，工业生产上常用硫酸铵、尿素、氨水、豆饼粉、花生饼粉、麸皮等原料作氮源。;; 无机元素包括主要元素(又称大量元素)和微量元素两类，这是依据微生物对它们需要量的大小划分的。 主要元素有P、S、Mg、K、Ca等； 微量元素有Fe、Cu、Mn、Zn、Mo等。 当盐浓度太高时，对微生物生长有抑制作用，而在较低浓度时却能刺激生长。 一般在复合培养基中由于加入许多动植物原料等都含有微量元素。;(4)生长因子 ;三、培养基确定方法;（3）最好先选择一种较好的化学合成培养基做基础，开始时先做一些摇瓶试验;然后进一步做小型发酵罐培养，摸索菌种对各种主要有机碳源和氮源的利用情况和产生代谢产物的能力。;摇瓶优化; 注意培养过程中的pH变化，观察适于菌种生长繁殖和适于代谢产物形成的两种不同pH。其次再确定各种重要的金属和非金属离子对发酵的影响。;pH控制摇床; （4）有些发酵产物，如抗生素，除了配制培养基以外，还要通过中间补料法，一面对碳及氮的代谢予以适当的控制，一面间歇添加各种养料和前体类物质，引导发酵走向合成产物途径。 ;（5）根据经济效益选择培基原料。 碳源的代用方向主要是寻找植物淀粉、纤维水解物，以废糖蜜代替淀粉、糊精和葡萄糖，以工业葡萄糖代替食用葡萄糖。同时，使用稀薄的培养基，适当减少碳氮配比。 有机氮源代替主要为减少或代替黄豆饼粉、花生饼粉、食用蛋白胨和酵母粉等含有丰富蛋白质的原料。代用的原料可以是棉籽饼粉、玉米浆、蚕蛹粉、杂鱼粉或麸汁、饲料酵母、石油酵母、骨胶、酒糟及各种食品工业下脚料等。;第二节 培养工艺的确定;温度 pH值 氧 种龄 接种量;1. 温 度 ;温度影响发酵方向;2．pH值 ;培养基pH在发酵过程中能被菌体代谢所改变