小麦萌发前后淀粉酶活性的比较知识讲解.docx

小麦萌发前后淀粉酶活性的比较 精品文档 精品文档 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 实验报告 实验课程：小麦萌发前后淀粉酶活性的比较 学生姓名： XXX 学号： XXX 专业班级： XXX 2017年4月25日 实验背景：淀粉是植物最主要的储藏多糖，也是人和动物的重要食物和发酵工业 的基本原料。淀粉经淀粉酶作用生成麦芽糖、葡萄糖等小分子物质而被机体利用。淀 粉酶是水解淀粉的糖昔键的一类酶的总称。按照其水解淀粉的作用方式，可以分成a 淀粉酶、一淀粉酶等。实验证明，在小麦、大麦、黑麦的休眠种子中只含有伕淀粉 酶，a?淀粉酶是在发芽过程中形成的，所以在禾谷类萌发淀粉酶的种子和幼苗中，这 两类淀粉酶都存在。其活性随萌发时间的延长而增高。本实验以淀粉酶催化淀粉生成 还原的性糖的速度来测定酶的活力淀粉水解成还原性糖,还原性糖能使3, 5-二硝 基水杨酸还原成棕色的3-氨基，5.硝基水杨酸。可用分光光度计法测定。 一、 实验目的 1、 学习分光光度法测定酶活力的原理与方法； 2、 了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。 二、 实验原理 淀粉酶是水解淀粉的糖昔键的一类酶的总称。实验证明，在某些植物如小麦、大麦的 休眠种子中只含有B -淀粉酶，a.淀粉酶是在发芽过程中形成的，所以在禾谷类萌发 的种子和幼苗中，这两类淀粉酶都存在。其活性随萌发时间的延长而增高。 本实验以淀粉酶催化淀粉生成麦芽糖的速度来测定酶的活力。麦芽糖是还原性糖，能 使3, 5-二硝基水杨酸还原成棕色的3.氨基5.硝基水杨酸，后者在500 nm处有最大吸 光度，而进行定量测定。 三、 实验仪器和试剂 1、 实验仪器： ①紫外?可见分光光度计；②离心机；③研钵. 2、 实验试剂 ①小麦种子（萌发种子10粒、干种子10粒）；②1%氯化钠溶液；③标准麦芽 糖溶液；④3, 5..二硝基水杨酸溶液；⑤0.02 mol/L磷酸缓冲液.⑥0.2%淀粉溶 液.. 四、 实验步骤 1?麦芽糖标准曲线制作 取7支具塞刻度试管，编号，按表1加入试剂: 表1制作麦芽糖标准曲线配方表 试剂 管号 1 2 I 3 4 5 6 1 麦芽糖标准液 (ml) 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸惘水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0 3,5 -二硝基水 杨酸 2 2 |2 |2 2 2| 2 充分摇匀,置于沸水浴中煮沸5 min。取出后流水冷却，加蒸循水定容至20 m L。以 1号管作为空白调零点，在500 nm波长下比色测定。以麦芽糖含量为横坐标，吸光 度值为纵坐标，绘制标准曲线。 2、小麦萌发前后的酶液提取 （1） 幼苗酶的提取：取萌发的幼苗10株入研钵，加1 % NaCI 3 ml，研磨成匀 浆，0-4 °C下放置20 min。离心，2000 r/min 10 min .测定上清酶液的总体积。 （2） 种子酶的提取：取干燥种子10粒作对照，操作方法同上。 3、二硝基水杨酸法测定酶活力 量取待测酶液1 ml，pH6.9的0.02mol/L磷酸缓冲液稀释10倍，作为酶活力测定 物。取6根试管按下表加各物质： 2 （种子酶 稀释液）试管编号 2 （种子酶 稀释液） 5.6 （空白管〕V （0.2%淀粉溶液）/ml爛隸M臧加热5車水盜丄3 mim入4%乩乩一稻慕戸 5.6 （空白管〕 V （0.2%淀粉溶液） /ml 爛隸M臧加热5 車水盜丄3 mim 入4%乩乩一稻慕戸 测定各管的A5时值 1￥ 0.5 五、 数据处理和分析 min,迅速冷却至 .加水稀释至201 0.5 nL混匀Q.5 、数据记录: （1）标准曲线: 麦牙糖含量 （mg 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 吸光度 0 0.234 0.493 0.698 0.998 1.286  吸光度 (2)小麦麦芽糖吸光度 试管编号 1 2 3 4 5 6 吸光度 1.105 1.093 2.204 2.120 0.003 0.002 吸光度平 均值 1.099 2.162 0. 0025 其中1、2号管是小麦干种子，3、4号管是小麦幼苗，5、6号管属于空白管 2、数据处理和分析 (1)将上面实验数据带入标准曲线直线方程即可计算出对应的麦芽概含量：小麦干种 子液麦芽糖含量：C种子.=1.754mg 小麦幼苗液麦芽糖的含量：C幼苗=3.421mg 空白管液麦芽糖含量：G =0.035mg (2)总酶活力单位=(Cl C) Xn XV酶 式中：C确为种子酶或幼苗酶分解淀粉产生的麦芽糖的浓度 (mg/ml) ； C。为表2中空白管的麦芽糖浓度；n为酶溶液稀释的倍数；V酶为提 取酶液的总体积(ml)设在40C、pH 6.9的条件下，3 min内水解淀粉释放1 mg