饲料中喹烯酮的测定高效液相色谱法.pdfVIP

DB43/T 1064 — 2015 饲料中喹烯酮的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中喹烯酮的高效液相色谱测定的方法。 本标准适用于我省配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中喹烯酮的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件； 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 采用乙腈提取试样中的喹烯酮，固相萃取小柱净化，高效液相色谱 - 紫外法测定，外标法定量。 4 试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合 GB/T 6682 一级水的规定。 4.1 甲醇 色谱纯。 4.2 乙腈 色谱纯。 4.3 乙腈。 4.4 固相萃取柱：中性氧化铝， 1000 mg/6mL。 4.5 喹烯酮标准品，含量≥ 98.0% 。 4.6 喹烯酮标准储备液：称取喹烯酮标准品 25 mg （精确到 0.01 mg）于 25 mL的容量瓶中，用乙腈溶 解并定容至刻度，即为 1.0 mg/mL 的喹烯酮标准储备液。 4 ℃以下避光保存，有效期为三个月。 4.7 喹烯酮标准工作液：精密量取适量喹烯酮标准储备液，用乙腈稀释成 0.2 μg/mL 、0.5 μg/mL 、 1.0 μg/mL、5.0 μg/mL 、 10 μg/mL、 50 μg/mL 的标准工作液，现配现用。 4.8 微孔滤膜： 0.22 μm，有机膜。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪：配置二极管阵列检测器或紫外检测器。 5.2 分析天平：感量 0.00001 g 和 0.001 g 。 5.3 离心机：转速≥ 10000 r/min ，带有 50mL离心管。 5.4 超声波清洗机。 1 DB43/T 1064 — 2015 6 采样与试样制备 6.1 采样按 GB/T 14699.1 的规定执行。 6.2 试样制备按 GB/T 20195 的规定执行。 7 测定步骤 7.1 提取 称取试样 2.5 g （精确到 0.001 g ）, 置于 100 mL 具塞锥形瓶中 , 准确加入 25.0 mL 乙腈， 超声 提取 10 min ，静置，液体转入 50 mL 离心管中 10 000 r/min 离心 5 min ，上清液备用。 7.2 净化 上清液过中性氧化铝柱，弃除初滤液，收集滤液过微孔滤膜，待测。 7.3 高效液相色谱参数 色谱柱： C18 柱 (250mm ×4.6mm， 5 μm)，或相当者。 流动相：甲醇 : 水（ V:V=60:40 ）。 流速： 1.0mL/min 。 进样量： 10 μL。 检测波长： 314nm。 7.4 试样测定 取试样溶液和相应的标准工作液进样， 以组分的保留时间定性， 以色谱峰面积积分值做单点或多点 校准， 外标法定量。 标准工作液和试样溶液中喹烯酮的响应值均应在仪器检测的线性范围内。 喹烯酮高 效液相色谱图参见附录 A，喹烯酮标准工作液色谱图参见附录 A 中图 A.1 ，配合饲料中添加喹烯酮标准 物质色谱图参见附录 A 中图 A.2 。 8 结果计算 试样中喹烯酮的含量由色谱数据处理软件或按下式计算获得： CS A V f 1000