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植物凝集素 ELISA 检测试剂盒 PHA 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验 .已知 PHA 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将 PHA 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标 记过的 HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物 A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中 PHA 的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制：植物凝集素 ELISA 检测试剂盒试剂盒成份（ 2-8℃保存） 96 孔配置 48 孔配置 配制 96/48 人份酶标板 1 块板（ 96T） 半块板（ 48T） 即用型塑料膜板盖 1 块 半块 即用型 标准品： 40nmol/L 1 瓶（ 0.6ml） 1 瓶（ 0.3ml ） 按说明书进行稀稀自备材料 蒸馏水。 加样器： 5ul、10ul 、50ul 、100ul、 200ul、500ul、1000ul 。振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 避免直接接触终止液和底物 A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 :植物凝集素 ELISA 检测试剂盒 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物 A、B 液时，避免使用带金属部分的加样器。 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 底物 A 应挥发，避免长时间打开盖子。底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取 OD 值。 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 :植物凝集素 ELISA 检测试剂盒 血清 -----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后， 1000 ×g 离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 血浆 -----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。 1000× g 离心 30 分钟去除颗粒。 细胞上清液 ---1000 × g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。 组织匀浆 -----将组织加入适量生理盐水捣碎。 1000× g 离心 10 分钟，取上清液 保存 ------如果样品不立即使用，应将其分成小部分 -70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在 37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 试剂的准备 :植物凝集素 ELISA 检测试剂盒 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备， 不能储存。 稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行： 0 nmol/L （空白对照） 原始浓度不用稀释直接加入 50ul 。洗涤缓冲液（ 50×）的稀释：蒸馏水 50 倍稀释。 操作步骤 :植物凝集素 ELISA 检测试剂盒 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡， 产生加样上的误差。 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。 每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液 1：1 稀释后加入 50ul 于反应孔内。 加入稀释好后的标准品 50ul 于反应孔、 加入待测样品 50ul 于反应孔内。 立即加入 50ul 的 生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀， 37℃温育 1 小时。 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，植物凝集素 ELISA 检测试剂盒振荡 30 秒，甩去洗涤液， 用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 每孔加入 80ul 的亲和链酶素 -HRP，轻轻振荡混匀， 37℃温育 30 分钟。 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 每孔加入底物 A、B 各 50ul ，轻轻振荡混匀， 37℃温育 10 分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入 50ul 终止液，加入终止液后应立即测定结果。 在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。 建议使用的实验方案 :植物凝集素 ELISA 检测试剂盒标准品浓度（ nmol/L ） A 40 40 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品局限 6 号