三聚氰胺的检测方法.pdfVIP

重量法、电位滴定法、高效液相色谱法、气相色谱－质谱联用法、液相色谱－质谱联用法、 毛细管电泳法、近红外线吸收法、比色法、免 疫学法 1.1 重量法：苦味酸法和升华法。 苦味酸法的原理是将三聚氰胺样品用水溶解， 再向该溶液中加入苦味酸使其与三聚氰胺生成 沉淀，根据生成沉淀的量计算出样品中三聚氰胺的含量。 升华法的原理是将样品置于升华装 置中， 使样品中三聚氰胺受热升华， 准确称取剩余固体的质量。 这两种方法用于工业上检测 三聚氰胺的含量准确度相对较高，但分析时间都比较 长，操作繁琐，不适合高效快速检测。 1.2 电位滴定法 电位滴定法在工业中检测三聚氰胺较重量法简单，实验时间较短，但准确度不高。其实验 原理： 以硫酸标准溶液滴定含有三聚氰胺的溶液， 通过公式用等当量点时消耗硫酸标准溶液 的体积计算出三聚氰胺的含量。不用于食品。 1. 3 高效液相色谱法（ HPLC） 用 HPLC 检测三聚氰胺含量， 检出限低， 准确度相对较高， 可用于食品中三聚氰胺的检测。 实验的一般操作步骤是：用沉淀法先将奶粉中的蛋白质沉淀，然后提取奶粉中的三聚氰胺， 将提取液用阳离子交换固相萃取柱净化，最后用高效液相色谱进行检测，外标法定量。 1. 4 气相色谱法和质谱联用法（ GC-MS） 与 HPLC 法比较， GC-MS 具有准确度高、检出限低（ 0.05 mg/kg ），更适合食品中三聚氰胺 的微量检测。 该方法样品经蛋白沉淀离心后过 MCX 固相萃取柱净化、氮气吹干、 硅烷化衍 生, 再由气相色谱－质谱联用仪检测。由于三聚氰胺为强极性化合物，难汽化，直接对其进 行 GC-MS 测定不但灵敏度低且峰拖尾严重，为此王征采用 N， O- 双三甲基硅基三氟乙酰 胺衍生化，极性的减弱使其容易进行汽化，有利于待测物和基质的分离 ,降低了背景化学噪 音的影响。王立媛等用 GC-MS 方法检测奶粉和鲜奶中三聚氰胺的加标回收率在 82.3%～ 110.0%之间，相对标准偏差（ RSD）＜ 10%，方法净化效果好、准确度高、灵敏度好。但是 GC- MS 法需要进行衍生化 , 样品处理步骤复杂 ,不适用于多杂质生物检材中三聚氰胺的快速 筛查和定量分析。 1. 8 比色法 由于牛奶中各种蛋白质基质可能干扰三聚氰胺的检测 , Fang Wei 等把基于酪蛋白的牛奶成 分分离， 然后向溶液中加入金的纳米颗粒。 金的纳米颗粒与三聚氰胺的相互作用导致了显著 的颜色变化， 显示出三聚氰胺的存在。 当三聚氰胺存在的时候， 溶液的颜色在几秒钟内从红 色变成了蓝色， 而且可以通过视觉观察和分光光度测定法检测。 该法提供了一种使用纳米颗 粒的高灵敏度探测手段， 从而防止人们因为摄入三聚氰胺而受到伤害的独特机遇， 对乳制品 早期筛查提供了一种可行的方法。 1. 9 免疫学法———试剂盒检测法（ ELISA） 免疫学法是一种快速检测三聚氰胺的方法， 其原理是利用萃取液通过均质及震荡的方式提取 样品中的三聚氰胺进行免疫测定。 样品经过甲醇离心处理， 氮气吹干再次甲醇溶解后放入到 试剂盒中，加入三聚氰胺 HRP 酶标记物，轻轻混合 60 s ，孵育 0.5 h 。将微空中的溶液倒 入水槽中，用洗液洗板多次。在吸水纸上拍打，向个孔中加入底物溶液，孵育 0.5 h ，最后 加入终止液体，用酶标记仪在 450 nm 下测吸光度。然后以三聚氰胺浓度半对数为横坐标 做标准曲线 , 确定被测样品的浓度。该法操作简便，分析速度快