人心肌肌钙蛋白I（CTNI）胶体金免疫层析分析法的研究-中国医学科学院中国协和医科大学硕士研究生学位论文.pdfVIP

l 761955 中离惕和管抖大t 咿@砾号付存能 硕士研究生学位论文 中罔协和医科大学研究生院 中国医学科学院中国协和医科大学硕士研究生学位论文 摘要 摘要 目前在工业化国家，心血管疾病是威胁人类生命的主要疾病之一，发病率和 死亡率均很高，对此类疾病进行早期诊断和治疗具有重大意义。心脏病的诊断包 括临床表现，心电图的变化和心凯损伤生化标志物的实验室检楠，其中心肌损伤 生化栋志物的检蹲在心肌损伤和急性心肌棱死的诊断方面超重要作用。而寻找和 筛选早期、灵敏、特异的心脏损伤标志物和简便、诀捷、灵敏的检测分析方法， 一直是该领域的重要研究内容。 随着对心IDl损伤标志物的深入研究和长期的临床实践验证，以前常用的标志 物如 AST (门冬氨酸氨基转移酶)， LDH (乳酸脱氢酶〉及其间工酶， CK (肌 酸磷酸撤酶〉及CK-MB (凯酸磷酸激酶罔工酶〉存在许多缺陷和不足，特异性 不强是其最主要的缺点。此外，在早期诊断和灵敏度方面也不理想，有可能造成 漏诊或误诊，因此已呈现出遥渐被新标志物取代的趋势。如目前常用的采用免疫 学技术测定血清cTnl (心肌肌钙蛋白1)、 cTnT (心肌肌钙蛋白T)和Mb (肌红 蛋白)等，它们在诊断心肌损伤方面价值更高，有取代心肌酶学指标的趋势。 在这些生化指标中. cTnI 尤为突出，它是心肌损伤的一种特异、灵敏的血 清标志物，具有以下特点:在急性心肌梗死发生后 4一12h 即有明显升高，可持 续 4-lOd. 可作为阜期诊断的指标，且对心肌损伤的灵敏度和特异性都很高， 因此cTnI的检测不仅可以用来早期诊断急性心肌梗死和心绞痛等，还可作为晚 入院病人的回顾诊断和动态诊断指标。 但是由于人心肌组织难以获得，因此从组织中大量提取纯化 cTr旺，把它作 为研究或者谚断阁的抗原是极其困难的，所以本实验采用 Fmoc 保护的氨基酸， 用面相法人工合成多肤 cTnI 抗原，其特点是选择合成天然 cTnI 蛋白上的…段氨 基酸多肤，具有免疫原性、且水溶性好，经高效液相层析纯化和质谱分析证实所 合成多肤达到后续实验的要求。同时为了加强这段多肤的免疫原性，把它和血蓝 蛋臼 (KLH) 载体偶联，用该连接物免疫家兔，采用经典的多克隆抗体制备技术 制备 cTnI 合成多肤抗体，采用酶联免疫吸附试验法 (ELISA) 对 cTnl 抗体进行 检测，达到实验要求。采用拧橡酸三销还原法制备金珞胶。用制备的抗体标记蝴 中国医学科学院中国协和医科大学硕士研究生学位论文 摘要 米级的胶体金颗粒和包被微孔硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane.NCM). 并结合层析技术建立了 cTnI 的胶体金免疫层析分析法(colloidal gold immuno• chromatographic assay , GIC的，获得了满意的结果。该方法具有较高的灵敏度 和特异性。为急性心肌梗死 CAMI) 高危人群的普查和医院辅助诊断 AMI 提供特 异、灵敏、简便、快速的诊断技术，为制备国产化 cTnl 试剂盒奠定了基础。 关键词: 心肌肌钙蛋白 I 心肌损伤多克隆抗体胶体金免疫层析 -2- Abstract 中国医学科学院中国协和医科大学硕士研究生学位论文 Abstract During these years , morbidity and mortality of cardiovascul