猪克隆胚胎生产技术论文：猪克隆胚胎生产技术及组蛋白乙酰化免疫荧光染色技术优化.pdfVIP

伯 将 卢 川 内 中 陆 怆 协 H h / | ι 丛 」 l l t T h 牡 相 市 y J 甲 片 八 阳肉 仰 川 山 阴 仲 爪 + 山 〕 伺 h 1 t训 油 f I T h 川 件 门 bMM A W 队 川 肌 H 附 H H H川 门 H 川 H 忡 比 」 l - - d I 占 咱 寸 V 中 八 ­ 爪 R 儿 且 而 N 呵 同 H 问 川 〕 札 7 川 川 世 』 「 t v 丁 H 仙 厅 f A A f v d l l d 寸 l A 卅 V ­ 叫 爪 M M w W 摘要 猪的体细胞核移植(克隆)技术在畜牧业生产、人类医学、基础研究等方面都有非常 重要的应用价值。但是，目前猪的体细胞克隆操作要求复杂、效率低、成本高，极大 地限制了该技术的推广。为建立一种经济、有效、方便而稳定的猪体细胞克隆胚生产 技术体系，以及为将来揭示猪克隆胚胎发育表观遗传修饰调控机理研究奠定基础。本 研究开展了如下试验: 试验探索了肺气对猪卵母细胞体外成熟及后续孤峰和克隆胚胎早期发育能力 的影响。猪卵母细胞随机分布在三组气相环境下(lung 创r; 5%02; 20%0z) ，经体外成 熟后检测其细胞核成熟情况及后续孤雌和克隆胚胎发育能力。结果发现:使用肺气成 熟的猪卵母细胞在核成熟率(66.5%vs.60.2%， 63.2%) 及后续孤雌胚胎卵裂率 (94.8%vs.94.2%， 85.2%)、囊胚率(39.5%vs.40.3%， 32.5%)、囊胚细胞总数(37vs.3 8 ， 32) 与 低氧(5%02)、高氧(20%02)差异不显著。此外，猪克隆胚胎卵裂率(88.3%vs.80.3%)、囊 胚率(7.3 %vs.l0.7%)和囊胚细胞数(34vs.3 6)与高氧(20%0z)也差异不显著。结果表明:人 体呼出的肺气可以安全、有效地成熟猪卵母细胞。 试验二:比较了三组气相环境下(5%02; 20%0 ; lung air)培养猪无透明带孤雌胚 2 胎早期发育效率。猪卵母细胞透明带经消化去除后，施以43V， 80间， ， 1 次的电激活后， 将无透明带的卵母细胞培养在WOW(wells ofwell , WOW)中，观察其体外发育情况e 结 果发现:低氧(5%02)和高氧(20%0 )之间的卵裂率、囊胚率、囊胚细胞数均差异不显著， 2 但囊胚率和囊胚细胞数明显高于肺气组(lung ai吟。结果表明:使用肺气培养猪无透明 带孤雌激活胚胎可能没有低氧(5%0 )和高氧(20%0 )效果好。 2 2 试验三:研究了化学半限定培养基和化学限定培养基对猪孤班和克隆胚胎早期发 育的影响。猪孤雌胚胎和克隆胚胎分别随机分布在PZM-3、 PZM-4、 PZM-5三种培养基