pcr实验室临床标本的处理核酸纯化程序.docxVIP

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2021-08-12 发布于四川
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pcr实验室临床标本的处理核酸纯化程序.docx

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PCR实验室临床标本的处理核酸纯化程序目的：标准临床标本的核酸提取、纯化等处理过程。范围：进行PCR检测的临床标本。职责：保证检测过程中，被检核酸不被破坏或损失。程序：血清标本的DNA获取：取待测样本血清100（11,分别加到离心管中；参加50|il样本处理液，振荡混匀后，放入加热变性仪中，96°C处理10分钟。取出离心管，12,000g离心lOmin,保存上清备用（如长期保存置于-20 °C）。血清标本的DNA/RNA的获取：取50|ul待测血清，参加含吸附剂的离心管中；每5分钟振摇一次，室温放置20分钟，10000转/分离心15秒钟；弃上清，参加140以洗涤液，混悬，10000转/别离心 15秒钟，尽量吸去上清；沉淀用140以重复洗涤液混悬，10000转/别离心15秒钟，尽量吸去上清；沉淀用30|dl核酸洗脱液混悬,94°C加热5分钟，10000 转/分昌心15秒钟；保存上清（注意：此时的RNA最易受RNA酶降解，请立即进行后续步骤）。分泌物标本、痰液的DNA获取：将分泌物（1ml）、尿液和培养液（400^1）参加1ml 离心管中，12000g离心5分钟；痰液需用lmol/1的NaOH 液化处理后再离心。向沉淀中参加50四1样本处理液，振荡混匀后，放入加热变性仪中，96°C处理10分钟；取出离心管，12,000g离心lOmin,保存上清备用（如长期保存置于-20°C）o