农林牧渔第4章固相析出分离技术.ppt

农林牧渔第4章固相析出分离技术 解析法是向溶液中加入某些物质，使溶质的溶解度降低，形成过饱和溶液而结晶析出。这些物质被称为抗溶剂或沉淀剂，它们可以是固体，也可以是液体或气体。解析法常用固体氯化钠作为抗溶剂使溶液中的溶质尽可能地结晶出来，这种结晶方法称为盐析结晶法。解析法还常采用向水溶液中加入一定量亲水的有机溶剂，如甲醇、乙醇、丙酮等，降低溶质的溶解度，使溶质结晶析出，这种结晶方法称为有机溶剂结晶法。 ④ 解析法 工业生产实例 （4）并用第一、第三种方法结晶 多粘菌丝E：多粘菌素E的脱盐脱色液，以弱碱性树脂中和至近中性，加等量丙酮，其硫酸盐就结晶析出。 利用丝裂霉素在甲醇种溶解度较大、在苯中较小的性质，将其粗品溶于少量甲醇中，加入2倍体积的苯，5℃放置过夜，就可得蓝紫色结晶。 制霉菌素：制霉菌素得乙醇提取液真空浓缩10倍，冷至5℃放置2 h，即可得结晶。 四环素碱：四环素酸性溶液，用氨水调pH至4.8，冷却至10℃，2 h后，四环素游离碱就可结晶析出。 （1）采用第四种方法结晶 （2）并用第一、第四种方法结晶 （3）并用第二、第一种方法结晶 晶核是在过饱和溶液中最先析出的微小颗粒。晶核的大小通常在几个纳米到几十个纳米。单位时间内在单位体积溶液中生成的新晶核数目，称为成核速度。 2、晶核的形成 ①温度一定时，当过饱和度超过某一值时，成核的速度随饱和度的增加而加快，但过饱和度太高时，溶液的粘度会显著增大，分子运动减慢，成核速度反而减小。 ②成核的速度随温度升高而升高，但达到最大值后，温度再升高，速度下降。 ③成核速度和溶质种类有关，阳离子或阴离子的化合价增加，越不容易形成晶核，在相同的化合价下，含结晶水越多，越不容易成核。对于有机物质，结构越复杂，分子量越大，成核速度越慢。 成核速度的影响因素 (1) 如有现成晶体，可取少量研碎后，加入少量溶剂，离心除去大的颗粒，再稀释至一定浓度（稍微过饱和），使悬浮液中具有很多小的晶核，然后倒进待结晶的溶液中，用玻璃棒轻轻搅拌，放置一段时间后即有结晶析出。 诱导晶核形成的常用方法 (2) 如果没有现成晶体，可取1～2滴待结晶溶液置表面玻璃皿上，缓慢蒸发除去溶液，可获得少量晶体，或者取少量待结晶溶液置于一试管中，旋转试管使溶液在管壁上形成薄膜，使溶剂蒸发至一定程度后，冷却试管，管壁上即可形成一层结晶。用玻璃棒刮下玻璃皿或试管壁上所得结晶，蘸取少量接种到待结晶溶液中，轻轻搅拌，并放置一定时间，即有结晶形成。 诱导晶核形成的常用方法 诱导晶核形成的常用方法 实验室结晶操作时，常使用玻璃棒轻轻刮擦玻璃容器的内壁，刮擦时产生玻璃微粒可作为异种的晶核。另外，玻璃棒沾有溶液后暴露于空气中，很容易蒸发形成一层薄薄的结晶，再浸入溶液中便成为同种晶核。同时用玻璃棒边刮擦边缓慢地搅动也可以帮助溶质分子在晶核上定向排列，促成晶体的生长。 在过饱和溶液中已有晶核形成或加入晶种后，以过饱和度为推动力，晶核或晶种将长大，这种现象称为晶体生长。晶体生长速度也是影响晶体产品粒度大小的一个重要因素。如果晶核形成速度大大超过晶体生长速度，则过饱和度主要用来生成新的晶核，因而得到细小的晶体，甚至无定形；如果晶体生长速度超过晶核形成速度，则得到粗大而均匀的晶体。 3. 晶体的生长 影响晶体生长速度的因素主要有杂质、过饱和度、温度、搅拌速度等。杂质的存在对晶体生长有很大的影响，有的杂质能完全制止晶体的生长；有的则能促进生长。 过饱和度增高一般会使结晶速度增大，但同时黏度增加，结晶速度受阻。 温度升高有利于扩散，因而结晶速度增快。经验还表明，温度对晶体生长速度的影响要比成核速度显著，所以在低温下结晶得到的晶体较细小。 搅拌能促进扩散，加快晶体生长，同时也能加速晶核形成，搅拌越剧烈，晶体越细。 二、影响结晶析出的主要条件 农林牧渔第4章固相析出分离技术 农林牧渔第4章固相析出分离技术 第4章 固相析出分离技术 盐析法 有机溶剂沉淀法 其他沉淀技术 结晶技术 第4章 固相析出分离技术 ?? 通过加入某种试剂或改变溶液条件，使生化产物以固体形式（沉淀和晶体）从溶液中沉降析出的分离纯化技术称为固相析出技术。? 结晶法： ? ?? 沉淀法 盐析法 有机溶剂沉淀法 等电点沉淀法 概念 沉淀法：在固相析出过程中，析出物为无定形固体时则称为沉淀法。 ? 结晶法：在固相析出过程中，析出物为晶体时称为结晶法。 4.1? 盐析法 概念：在高浓度中性盐存在的情况下，蛋白质等生物大分子在水溶液中的溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析。 优点：经济、安全、操作简便、应用范围广 缺点：盐析法分辨率不高 一、盐析法的原理 (蛋白质) 1）中性盐离子破坏蛋白质表面水膜 。 2）