【公开课教案】基因工程的基本操作程序(教案).pdfVIP

基因工程的基本操作程序 一 . 教学内容： 基因工程的基本操作程序 二 . 学习内容 本节是《基因工程》专题的核心，上承《 DNA重组技术的基本工 具》一节，下接《基因工程的应用》 。通过教材上的图示，理解掌握 基因工程的相关概念和操作程序，理解基因工程操作的意义。 三 . 教学重点和难点 1. 教学重点 提取目的基因的方法 目的基因导入受体细胞的途径。 基因工程基本操作程序的四个步骤。 2. 教学难点 从基因文库中获取目的基因。 利用 PCR技术扩增目的基因。 四. 教学过程 基因文库：用重组 DNA技术将某种生物细胞的总 DNA 或染色体 DNA的所有片断随机地连接到基因载体上，然后转移到适当的宿主细 胞中，通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系（克隆） ，在制备 的克隆数目多到可以把某种生物的全部基因都包含在内的情况下， 这 一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库。 基因组文库：用限制性内切酶切割细胞的整个基因组 DNA，可以 得到大量的基因组 DNA片段，然后将这些 DNA片段与载体连接， 再转 化到细菌中去，让宿主菌长成克隆。这样，一个克隆内的每个细胞的 载体上都包含有特定的基因组 DNA片段，整个克隆群体就包含基因组 的全部基因片段总和称为基因组文库。 cDNA基因文库：cDNA是由细胞内的 mRNA通过逆转录的方式获得 的，其包含的一个细胞内的表达信息。 多细胞生物的不同细胞的表达 信息往往是不同的。若将某一个细胞全部的 mRNA（又称为这个细胞 的转录组）都逆转录成 cDNA，再将这些 cDNA连接到载体上（基本上 不打断）并转入微生物，那么这些微生物就组成了 cDNA文库。 cDNA 组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。 同一定义也适用于某种生物的线粒体 DNA或叶绿体 DNA的基因文 库。 由于制备 DNA片段的切点是随机的， 所以每一克隆内所含的 DNA 片段既可能是一个或几个基因， 也可能是一个基因的一部分或除完整 基因外还包含着两侧的邻近 DNA顺序。 基因文库与基因库的概念不同。 基因库是指某一生物群体中的全 部基因。基因文库与基因克隆的概念也有区别， 基因克隆是只包含某 些特定基因或 DNA片段的克隆。基因文库中包含着为数众多的克隆， 建成后可供随时选取其中任何一个基因克隆之用。 PCR技术：多聚酶链式反应技术， 1985 年美国 PE-Cetus 公司人 类遗传研究室的 Mullis 等发明，它具有特异、敏感、产率高、 快 速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点。 PCR反应的基本成分包括：模板 DNA（待扩增 DNA）、引物、 4 种 脱氧核苷酸（ dNTPs）、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于 DNA的天 然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR由变性——退火——延伸三个基本反应步骤构成： ①