《基因工程的原理和技术》ppt课件讲义.ppt

目的基因与质粒的连接 基因DNA文库的构建 将总DNA经过酶解，分离不同长短的DNA片段。包含的基因片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，感染细菌或体外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因文库。 基因探针： 基因探针就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列。它包括整个基因，或基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 基因探针（DNA探针）与目的基因杂交，有无杂交带 传统的遗传育种方法有哪些？ 传统的遗传育种方法能否解决不同种生物优良性状的重组问题？ 基因工程技术如何解决不同种生物优良性状的重组问题？ 基因工程的应用 基因工程的应用 一、基因工程与作物育种 二、基因工程与疾病治疗 （１）基因工程药物 （2）基因诊断 （3）基因治疗 三、 基因工程与环境保护 （Suitable for teaching courseware and reports） 基因工程的原理和技术 基因工程原理和技术 概念：基因工程，又叫基因拼接技术或DNA重组技术，它是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞中，定向的改造生物的遗传性状。 一、基因工程的操作步骤： ①目的基因的获取； ②形成重组DNA分子； ③重组DNA 导入受体细胞； ④筛选含有目的基因的受体细胞； ⑤目的基因表达。 1.第一步：目的基因的获取 （1）方法： ①从基因文库中获取目的基因 ②利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因（目的基因的序列已知） ③化学方法合成目的基因（目的基因的序列已知） ①从基因文库中获取目的基因 用限制酶切成许多片断 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入受体菌的群体储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。 ②利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。 聚合酶链式反应（PCR技术） 变性：双链DNA解链成为单链DNA 复性（退火）：部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合 延伸：以目的基因为模板，合成互补的新DNA链 双链DNA 1.变性 升温至95℃ 单链DNA 2.复性 降温至60℃ 引物与母链结合 3.延伸 升温至72℃ DNA聚合酶 解旋 PCR技术与原理 Taq DNA聚合酶有耐高温的特点 思考：PCR技术扩增目的基因，需要什么前提和条件？过程如何？原理是什么？ 聚合酶链式反应(PCR技术)扩增 原理： 目的： 前提： 条件： DNA复制 获得大量的目的基因 有一段已知目的基因（两端）的核苷酸序列,以便根据这一序列合成引物。 模板DNA（目的基因） 耐高温DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶) 四种脱氧核苷酸 两种DNA引物 人工合成基因的方法 反转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA ③化学方法合成目的基因 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 目的基因的mRNA 单链DNA(cDNA) ③化学方法合成目的基因 通过化学合成的目的基因是否含有粘性末端？ 大片段DNA 打成许多小片段 小片段DNA 目的基因 载入运载体 细菌 重组DNA分子 重组DNA分子 例如：从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫蛋白的基因 如果运气不好，在打成小片段时，有可能把抗虫基因打断…… 基因组文库 如何从基因文库中获取目的基因? 大片段DNA 打成许多小片段 小片段DNA 目的基因 载入运载体 细菌 重组DNA分子 重组DNA分子 基因组文库 对基因组文库的所有细菌进行逐一筛查 找出有抗虫蛋白的菌落 该菌落所携带的基因片段就含有目的基因 例如：从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫蛋白的基因 容易吗？ 2、形成重组DNA分子（构建基因表达载体) 基因表达载体的组成 启动子 目的基因 终止子 复制起点 标记基因 通常用同一种限制酶切割目的基因和载体(质粒)，形成相同的粘性末端，再用DNA连接酶将二者连接,形成重组DNA分子（基因表达载体）。 3、将重组DNA导入受体细胞 转化 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 1.将重组DNA导入植物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 2.将重组DNA