实际应用生物技术第四部分.ppt

实际应用生物技术第四部分;第四部分 微生物生物技术;第一节 微生物杀虫剂 第二节 动物杀虫剂 第三节 防治植物病害的微生物 第四节 生物除草剂;第一节 微生物杀虫剂;DDT最初是在19世纪70年代合成的，但直至20世纪30年代末人们才发现它具有杀虫作用，其杀虫机制是作用于昆虫的神经与肌肉组织。;马拉硫磷（malathion）； 对硫磷（parathion）； 二嗪磷（diazinon）。 第一代有机磷化合物可以抑制乙酰胆碱脂酶，从而影响运动神经元与昆虫脑中神经元的功能，控制昆虫的数目。 对生态的影响，60年???大量使用，DDT它在环境中可存留15~20年，在很多生物的脂肪组织中积累，浓度逐渐升高，影响生长发育，如在北美，有些鸟类数目急剧下降，这与DDT有直接关系。 另外长期施用，抗性增加，高浓度，另有些也杀死有益的昆虫，天敌遭到灭顶之灾，恶性循环。;使用微生物或动、植物制成的生物杀虫剂就是人们的选择之一。;目前的微生物杀虫剂包括：;一、病毒杀虫剂;① 核型多角体病毒（nucleopolyhedrosis virus，NPV）;② 质型多角体病毒（cytoplasmic polyhedrosis virus，CPV）;③ 颗粒体病毒（granulosis virus，GV）;二、用DNA重组技术改造杆状病毒杀虫剂;现对杆状病毒的基因工程改造主要集中在：;★① 表达外源毒蛋白的杆状病毒： ;如有报道将一种北非蝎子的昆虫特异性神经毒素的基因克隆到一个杆状病毒株中；还有人将一种蒲氏螨的神经毒素Txp-1的编码基因转入杆状病毒。比用野生型的病毒效果昆虫死亡提高50%，而对小鼠和植物均无影响。;众所周知，苏云金杆菌是目前广泛使用的生物杀虫剂，将苏云金杆菌编码的δ内毒素基因引入杆状病毒构建重组病毒，是常用的对杆状病毒进行改造的策略。遗憾的是，尚未得到效果良好的重组杆状病毒。究其原因，可能是因为δ内毒素需经过复杂的细胞内加工从非活性→活性。;★② 能改变昆虫正常生活周期的重组杆状病毒：;在昆虫的生活史中，保幼激素水平的降低会导致幼虫停止进食变成蛹，人们便克隆了编码保幼激素酯酶的基因，重组杆状病毒使得幼虫进食显著减少。还有利尿激素可以和抗利尿激素一起调节昆虫体内水的平衡，利尿激素过量表达可以导致昆虫脱水，进而死亡。 反义RNA技术也可用于重组杆状病毒的构建，导入某一昆虫基因的反义RNA，可抑制该基因的翻译，从而引起昆虫的代谢异常，增强杀虫效果。;★③ 对杆状病毒基因组进行修饰和加工：;三、细菌杀虫剂;① 苏云金杆菌杀虫剂（Bacillus thuringiensis，Bt）;Bt必须经吞食过程进入昆虫体内才能杀死昆虫，与昆虫表面接触则不起作用，这样在一定程度上限制了它的广泛应用。另外，Bt毒素只能在昆虫发育的某一特定阶段杀死昆虫，因而只能在昆虫生活史的某一特定阶段应用。 在实际应用中，Bt与吸引昆虫的物质一起喷酒，可以增加昆虫吞食的可能性。伴胞晶体在环境中可存在1天到1月不等。主要是受光照的影响。;其作用机理见：;;;如华中农业大学国家Bt农药工程中心、湖北省农科院Bt中心、武大生科院、东湖高科科诺生物农药等。;② 利用DNA重组技术对毒素基因进行改造;▲ 重组Bt菌株： 一旦克隆到毒素基因，人们就可以对它进行基因工程改造和操作了。根据毒素基因推出的氨基酸序列和其他毒素蛋白的比较，人们发现在各种Bt毒素蛋白中存在着一个共同的毒性结构域，而且，仅表达该毒性结构域的蛋白产物具有Bt毒素的全部杀虫活性。 把不同的毒素基因进行基因融合也能产生新的蛋白，有些融合蛋白比单独的毒素蛋白毒性更强，甚至有的融合蛋白还能获得全新的生物功能。;▲ 转基因抗虫植物或微生物： 转基因抗虫作物不仅具有十分显著的社会效益，同时也已形成一个巨大的产业。目前世界上有多家生物技术公司正在致力于转基因抗虫作物的开发研究和推广。 如：2种抗虫马铃薯：抗鞘翅目昆虫、抗甲虫。 1种抗虫棉花：抗棉铃虫。 3种抗虫玉米：抗鳞翅目昆虫。 绝大多数是用Bt毒蛋白基因，如Monsanto，DuPont，Agrevo，Calgene，DNA Plant Tech，Plant Genetic System Co等。;③ 其他抗虫细菌;四、真菌杀虫剂;① 虫霉类真菌;② 造成“僵病”的真菌;在利用真菌防治虫害时，可以通过人工培养大量收获真菌菌体或分生孢子，把它们制成菌剂，大面积喷洒。 如将白僵菌用于防治松毛虫、松针毒蛾、油桐蚜虫、茶叶毒蛾、大豆食心虫、杨树天牛等害虫，取得了较好的效果。但同时也能感染家蚕，因此，在养蚕地区要控制白僵菌的使用，另外人如果吸入过量的白僵菌孢子也会产生类似于感冒的症状，要注意防护。;目前许多真菌杀虫剂都已进入了大规模商业化生产阶段：;第二节 动物杀虫剂;一、原生