正相柱洗脱的时候组分是按照极性从小到大的顺序洗脱下来的.pdfVIP

1. 正相柱洗脱的时候组分是按照极性从小到大的顺序洗脱下来的， 洗脱剂 （如甲醇、乙腈、 正己烷等）极性从小到大，常用填料为硅胶等； 反相柱洗脱的时候组分是按照极性从大到小的顺序洗脱的，洗脱剂（如甲醇 -水）性从 大到小选择，常用的填料有 ODS 等。 2. 差速迁移机制，分配色谱（分配系数） 、吸附色谱（物理吸附） 、离子交换色谱（离 子交换）、空间排阻色谱（分子大小）各有不同。 正相柱反相柱的使用 特别注意 HPLC 使用过后的系统清洗：含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法： 1、 先用 100% 的纯水冲洗，打开排放阀，用 3~5ml/min 的流量，洗二十分钟左右后停泵。 此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗 2 、 再用 95 ：5 的甲醇 /水清洗整个系统，关闭排放阀，用 1ml/min 的流量，洗 30~60 分钟 后停泵。此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用 5% 的甲醇主要是为了保护色谱柱。 3 、 最后用 100% 的甲醇清洗整个系统，用 1ml/min 的流量，洗 2 分钟左右，然后关机。如 果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。 当固定相的极性大于流动相的极性时，可称为正相分配色谱或简称正相色谱 .若固定相的极 性小于流动相的极性时，可称为反相分配色谱或简称反相色谱 .在用于正相色谱时，可使用如正 己烷的低极性流动相，在用于反相色谱时，可使用甲醇或水的强极性流动相 . 正相色谱用的固定 相通常为硅胶（ Silica ）以及其他具有极性官能团胺基团，如（ NH2 ，APS ）和氰基团（ CN ， CPS ）的键合相填料。 这种填料做成的柱子就称为正相柱 .反向色谱用的填料常是以硅胶为基质， 表面键合有极性相对较弱官能团的键合相 ,常用的反向填料有： C18 （ODS ）、 C8 （MOS ）、 C4 （Butyl ）、 C6H5 （Phenyl ）等 .这种填料做成的柱子就称为反相柱 . 正相柱和反相柱缘于， 柱上固定相与流动相之间极性的对比。 若固定相极性大于流动相， 为 正相柱，反之，为反相柱。通常为反相柱应用较多。所有色谱均适用，包括纸色谱和薄层。 现在一般都用反相，正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。 正相的固定性是极性的， 流动相是非极性的，适于分离强极性物质。 反相的固定性是非极性的，流动相是极性的，适于 分离弱极性物质。 正相色谱柱与反相色谱柱的区别 本质上是填料 (固定相 )的不同 ,正相色谱柱填料极性强 ,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料 极性弱，洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明： 1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶（ Silica ）以及其他具有极性官能团胺基团， 如（ NH2 ，APS ）和氰基团（ CN ，CPS ）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（ SiOH ）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品 中各组分的极性大小， 即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。 正相色谱使用的流动相极性相对 比固定相低，如正已烷（ Hexane ），氯仿（ Chloroform ），二氯甲烷（ Methylene Chloride ）等。 2 、反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质， 表面键合有极性相对较弱官能团的键合 相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出 色谱柱的顺序是极