细胞培养学课件：第七章 个别细胞和组织的培养.pptVIP

五、淋巴细胞的培养 通过离心，一定比重的血细胞分布于相应密度梯度的分离液中，可以分离出不同种类的血细胞。红细胞和粒细胞的比重约为1.092，单核细胞和淋巴细胞为1.075～1.090。常用Ficoll-Hypaque和Percoll分离血细胞。人血细胞的分离用比重为1.077的分离液。 1. Ficoll-Hypaque分离法 【材料 】人或动物的肝素抗凝血 Ficoll-Hypaque分离液 培养液以RPMI1640为佳 【流程】 将Ficoll-Hypaque加入离心管，体积不超过离心管的1/4。 用平衡盐溶液将抗凝血稀释1倍，然后将稀释血液轻轻加于Ficoll-Hypaque上面，二者在离心管里的高度为2：1。 2000r/min离心20min。 吸出需要细胞层的细胞悬液，加平衡盐溶液洗2次。 用培养液重悬细胞沉淀，进行培养。 【结果分析】 离心后离心管内液体呈5层。第1层是血浆和血小板，第2层是单个核细胞，第3层是Ficoll-Hypaque，第4层是粒细胞，第5层是红细胞。 血浆和血小板 单核细胞 Ficoll-Hypaque 粒细胞 红细胞 【注意事项】 离心前，血液和Ficoll-Hypaque间