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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 107365867 A
(43)申请公布日
2017.11.21
(21)申请号 201710786937.X C12N 15/11(2006.01)
(22)申请日 2017.09.04
(71)申请人 天津华大医学检验所有限公司
地址 300308 天津市东丽区空港经济区环
河北路80号空港商务园东区E3楼
申请人 广州华大基因医学检验所有限公司
深圳华大基因股份有限公司
(72)发明人 宋炎 张乐橦 刘磊 李普均
张盼 王晶晶 李志隆 刘继龙
叶明芝
(74)专利代理机构 北京品源专利代理有限公司
11332
代理人 巩克栋
(51)Int.Cl.
C12Q 1/68(2006.01) 权利要求书3页 说明书16页
序列表4页 附图8页
(54)发明名称
一种用于检测基因组目标区域的引物组合
物及其应用
(57)摘要
本发明涉及一种用于检测基因组目标区域
的引物组合物及其应用，具体涉及通过血浆游离
DNA和数字PCR检测肺癌的EGFR突变位点的引物
组合物，及其组成的检测试剂盒及应用。本发明
引物组合物对应相同的模板区域，在同一扩增反
应中发挥作用，能够保证扩增特异性前提下提高
扩增效率，适用于扩增低拷贝数的短片段模板，
且所述引物组合物具有高灵敏性，能够检测EGFR
基因23种热点低频突变，需要样本量低，适用于
血浆等液体样本检测效果好，还可兼顾完整基
因。
A
7
6
8
5
6
3
7
0
1
N
C
CN 107365867 A 权 利 要 求 书 1/3页
1.一种用于检测基因组目标区域的引物组合物，其包含：
第一组引物，所述第一组引物包含第一正向引物和第一反向引物，其中，所述第一正向
引物的3’端包含目标区域特异性正向引物，5’端包含第一核酸序列；所述第一反向引物的
3’端包含目标区域特异性反向引物，5’端包含第二核酸序列；
第二组引物，所述第二组引物包含第二正向引物和第二反向引物，其中，所述第二正向
引物包含第一核酸序列；所述第二反向引物包含第二核酸序列。
2.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，所述第一、第二核酸序列的长度分
别不超过所述目标区域特异性正向引物、反向引物的50％；
优选地，所述第二正向引物的3’端包含所述目标区域特异性正向引物5’端部分序列；
所述第二反向引物的3’端包含所述目标区域特异性反向引物5’端部分序列；
优选地，所述第二组引物的正向、反向引物的总长度不超过第一组引物的正向、反向引
物的90％；
优选地，所述第一组引物与所述第二组引物的Tm值相当，优选为相差不超过5℃，进一
步优选为相差不超过2℃；
优选地，所述第一、第二组引物的Tm值低于对应的探针Tm值，差异不小于5℃；
优选地，所述第一、第二组引物的Tm值分别为45-65℃，优选为55-62℃；
优选地，所述第一组引物的3’端目标区域特异性引物长度为14-40bp，优选为18-30bp；
优选地，所述第二组引物的3’端目标区域特异性引物长度为14-40bp，优选为18-30bp；
优选地，所述引物组的扩增产物长度为不小于30bp。
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