雷帕霉素促进自噬并降低神经组织损伤和脊髓损伤后运动功能障碍.docx

雷帕霉素促进自噬并降低神经组织损伤和脊髓损伤 后的运动功能障碍 摘要 : 哺乳动物雷帕霉素的受体 (mTOR)是负向调节自噬的丝氨酸 / 苏氨酸激酶。雷帕霉是 mTOR信号抑制剂，可以促进自噬并在中枢神 经系统 (CNS) 的几种疾病中起到神经保护作用。在本研究中，我们 评估了小鼠脊髓损伤 (SCI) 后，应用雷帕霉素是否促进自噬，并降 低神经组织损伤和减少运动功能障碍。 我们的结果表明雷帕霉素的应 用大大减少了损伤脊髓组织中 p70S6K 蛋白质的磷酸化以及 LC3 和 Beclin 1 的高表达。此外，损伤脊髓组织中，雷帕霉素组的神经元 丢失和细胞死亡率明显低于溶剂对照组。 并且， 在大鼠后肢运动功能 评分-- （BMS评分）中，雷帕霉素处理组得分明显高于溶剂对照组。 这些结果表明，脊髓损伤后，雷帕霉素通过抑制 mTOR信号通路，提 高自噬水平， 并减少神经组织损伤和运动功能障碍。 脊髓损伤后应用 雷帕霉素治疗可能成为一种新的治疗策略。 关键词： 自噬； Beclin1 ； LC3； 雷帕霉素靶蛋白；雷帕霉素；脊髓 损伤 前言： 雷帕霉素是一种大环内酯类药物，最初被用作抗真菌剂。雷 帕霉素是一种特殊的哺乳动物雷帕霉素受体阻滞剂 (Ravikumar et al., 2004; Schmelzle and Hall, 2000) 。它结合于胞质的 FK 结合 蛋白(FKBP12)。雷帕霉素 -FKBP12复合物抑制 mTO，R 阻止 p70S6K 和 4EBP1的磷酸化 (Vignot et al., 2005) 。因此，雷帕霉素抑制 mTOR 从 而 促 进 自 噬 (Kamada et al., 2004;Klionsky and Emr, 2000; Schmelzle and Hall, 2000; Wang and Klionsky, 2003) 。 自噬是一种细胞内的分解代谢的机制， 通过自噬溶酶体途径降解 细胞质成分 (Mizushima, 2004) 。这种机制对维持稳态起着重要的作 用，在某些疾病中起到保护作用 (Hara et al., 2006; Liang et al., 1999; Ru-binsztein et al., 2005; Shintani and Klionsky, 2004)。 自噬在细胞生长和应激状态下清除或者再利用长寿蛋白和受损的细 胞器(Levine and Klionsky, 2004;Shintani and Klionsky, 2004) 。 已有研究表明，自噬对正常细胞的生长，分化和存活也很重要 (Reggiori and Klionsky, 2002; Schmelzle and Hall, 2000) 。 新近研究表明， 应用雷帕霉素能够增强自噬， 在亨廷顿病和帕金森病 等某些神经退行性疾病中能够保护神经细胞 (Malagelada et al., 2010; Ravikumar et al.,2004) 。在这些退行性疾病中，应用雷帕霉 素诱导自噬能够增强对聚集蛋白的清除从而减少其毒性 (Berger et al., 2006; Webb et al., 2003) 。以往的研究表明，在创伤性脑损 伤和脑缺血后的神经组织中自噬活动是增强的 2009; Diskin et al., 2005; Ramiet al., 2008) (Bigford et al., 。应用雷帕霉素增 强自噬的活性并降低脑外伤和新生儿缺氧缺血性脑损伤的神经组织 损伤(Carloni et al., 2008; Erlich et al., 2007a) 表明，自体吞噬增强可以减少受中枢神经系统（ 胞的凋亡 (Carloni et al., 2008; Pan et al., 。一些研究也 CNS） 中受损神经细 2008) 。因此，使用雷帕霉素促进自噬被认为能够在中枢神经系统中 起到神经保护功能。 我们此前曾报道，脊髓损伤（ SCI）后受损的神经组织中自噬活 性显著增强 (Kanno et al., 2009b, 2011) 。然而，在 SCI 后受损神 经组