蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒工艺的优化_顾建阳.pdfVIP

· · 中国生物制品学杂志2015 年8 月第28 卷第8 期 Chin J Biologicals August 2015 ，Vol. 28 No. 8 848 ·技术方法 · 蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒工艺的优化 △ △ 顾建阳 ，刘旭光 ，郭占龙 ，孙志伟 ，杜金 东，徐文，孙宇，曹海丹，刘燕，曾亮，王思燕，王亚军 长春生物制品研究所有限责任公司，吉林长春130062 摘要：目的 优化蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒的工艺参数。方法 在不同进样量（600、700 和800 ml）时，检 测经蔗糖密度梯度离心纯化后各紫外检测峰的糖浓度、血凝滴度及卵清蛋白含量，并对血凝滴度大于1 ∶ 480 的检测 峰样品进行蛋白质含量和血凝素含量检测，确定最佳收峰位置、糖度范围及病毒浓缩液进样量；在不同比例的30% 和50% 的蔗糖溶液、不同离心时间（2、3 和4 h）条件下对流感病毒浓缩液进行蔗糖密度梯度离心纯化，检测纯化后的 病毒纯化液蛋白质、血凝素及卵清蛋白含量，计算蛋白质含量与血凝素含量比值及血凝素回收率，确定最佳离心时 间。结果 确定最佳收峰位置为第三峰，糖度范围为30% ～ 50%之间；当病毒浓缩液进样量为600 ～ 700 ml 时，30% 蔗糖溶液进液量为450 ～ 550 ml ，55%蔗糖溶液进液量为400 ～ 500 ml ，转速为90 639 × g 离心3 h 后，可获得最佳 纯化效果。结论 确定了蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒的最佳工艺参数，为进一步提高流感病毒的纯化效果提 供了参考。 关键词：流感病毒；蔗糖密度梯度离心；纯化 中图分类号：R373. 1 + 3 R392-33 文献标识码：A 文章编号：1004 5503 （2015）08-0848-05 - DOI:10.13200/ki.cjb.001012 Optimization of procedure for purification of influenza virus by sucrose density gradient centrifugation GU Jian-yang, LIU Xu-guang, GUO Zhan-long, SUN Zhi-wei, DU Jin-dong, XU Wen, SUN Yu, CAO Hai-dan, LIU Yan, ZENG Liang, WANG Si-yan, WANG Ya-jun Changchun Institute of Biological Products Co., Ltd., Changchun 130062, Jilin Province, China Corresponding author: WANG Ya-jun, E -mail: wyj8015@163.com Abstract ：Objective To optimize the technological parameters of purification procedure for influenza virus by sucrose density gradient centrifugation. Methods The influenza virus at various sample loadings were purified by sucrose density gradient ce