植物中SOD的分离提取及性质研究.docx

植物中 SOD 的分别提取及性质讨论 前言： 超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase简) 称 SOD，是一种生物活 |精. |品. |可. |编. |辑. |学. |习. |资. |料. * | * | * | * | |欢. |迎. |下. |载. 性蛋白质，是人体不行缺少、重要的氧自由清除剂，也是目前为止发觉的唯独的以自由基为底物的酶； SOD 广泛存在于生物界，是防备氧毒害的关键酶； SOD 主要有CuZn-、Mn-、Fe-SOD 三种类型同工酶，它们共同的生物学作用是专一地清除生物氧化中产生的超氧阴离子自由基（对细胞组分及细胞 器，特别是生物膜有严峻的损耗作用） ，具有抗衰老、抗辐射、抗癌 等生理作用；在医药中， SOD 可用于治疗辐射病、自身免疫性疾病、炎症等；在食品中，可用于保健食品添加剂；在化妆品中，可防止皮 肤衰老、抗炎、防晒等作用；植物中大蒜的 SOD 含量丰富，所以， 本试验讨论大蒜中 SOD 的性质，并确定 SOD 同工酶类型； 材料及方法： 一、试剂 PH7.8 0.05mol/l 磷酸盐缓冲溶液 PH8.2 50mmol/l Tris-HCL 0.026 mol/L 蛋氨酸（ Met）磷酸钠缓冲液 : 精确称取 L- 蛋氨 酸（ C5H11NO2S，MW=149.2）1 0.3879g 于 100mL小烧杯中，用少量 0.1 mol/L pH7.8 的磷酸钠缓冲液溶解后，移入 100mL容量瓶中并用 0.1 mol/L pH7.8 的磷酸钠缓冲液定容至刻度，充分混匀（现用现配）；4℃冰箱中储存可用 1～ 2d； 4321067.5 × 10 －4 mol/L NBT 溶液: 精确称取 NBT（ COHOCl N O， 4 3 2 10 6 MW=817.）7 0.1533g 于 100mL小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，移入 |精. |品. |可. |编. |辑. |学. |习. |资. |料. * | * | * | * | |欢. |迎. |下. |载. 250mL 容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，充分混匀（现配现用）； 4℃ 冰箱中储存可用 2～ 3d； 含 1.0 μmol/L EDTA 的 2 × 10 －5 mol/L 核黄素溶液 : A 液：精确称取 EDTA（ MW=29）2 0.00292g 于 50mL小烧杯中，用少量蒸馏水溶解； B 液：精确称取核黄素（ MW=376.3）6 0.0753g 于 50mL小烧杯中， 用少量蒸馏水溶解； C液：合并 A 液和 B 液，移入 100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，此溶液为含 0.1mmol/L EDTA 的 2mmol/L 核黄素溶液； 4℃冰箱中储存可用 8～ 10d；该溶液应避光储存，即用黑纸将装有该液的棕色瓶包好，置于 4℃冰箱中储存； 当测定 SOD酶活时，将 C 液稀释 100 倍，即为含 1.0 μmol/L EDTA － 5的 2 × 10 mol/L － 5 0.05 mol/L pH7.8 磷酸钠缓冲液 取 0.1 mol/L pH7.8 的磷酸钠缓冲液 50mL，移入 100mL容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，充分混匀； 4℃冰箱中储存备用； 50mmol/l 邻苯三氛：称取邻苯三氛 0.063g，用 10mmol/lHCL 溶液溶解，定容至 10ml，避光储存 附录 I |精. pH0.2mol/L pH 0.2mol/L Na2 HPO4 0.2mol/L NaH 2PO4 |可. |编. |学. |学. |习. |资. |料. * | 5.88.0 5.8 8.0 92.0 6.0 12.3 87.7 6.2 18.5 81.5 6.4 26.5 73.5 6.6 37.5 62.5 6.8 49.0 51.0 7.0 61.0 39.0 7.2 72.0 28.0 7.4 81.0 19.0 7.6 87.0 13.0 7.8 91.5 8.5 8.0 94.7 5.3 | * | * | |欢. |下. |下. |载. 附录 II Tris-HCl 缓冲溶液（ 0.05mol/L Tris 溶液和 X mL 0.1mol/L HCl 混匀后，加水稀释到 100mL ） HpX/mL H p X/mL H p X/mL H p X/mL 7 7 8 45.7 34.5 14.7 .1 .8 .5 7 44.7 7 32.0 8 12.4 .2 .9 .6 7 8 8 .3 43.4 .0 29.2 .7 10.3 7 42.0 8 26.2 8 8.5 .4 .1 .8 7 40.3 8 19.9 8 7.0 .5 .2 .9 7 8 9 .6 38.5 .3 17.2