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Diagnostic Microbiology: 微生物学的一个分支 ,主要研究各种微生 物的实验室方法 ,即如何快速、正确地检出微生物，以帮助诊断或判 断。 * 微生物分类的基础 : （三种基本类型） 1、非细胞型微生物：这类微生物体积小，能通过细菌滤器、无细胞 结构、无产生能源的酶系统， 由单一核酸 （DNA 或 RNA) 核蛋白衣壳 组成。必须在活的易感细胞内生长繁殖。属于这类的微生物是病毒。 2、原核细胞型微生物 :他们由单细胞组成，细胞核的分化程度较低， 仅有原始核，染色体仅有单个裸露的 DNA 分子，无核膜和核仁。细 胞壁由肽聚糖构成，缺乏完整的细胞器。属于这类的微生物有细菌、 放线菌、螺旋体、支原体、立克次体。 3、真核细胞型微生物：他们大多由多细胞组成，细胞核分化程度高， 有典型的核结构（核膜、核仁核染色体）细胞壁由纤维素、几丁质构 成，属于这类型的微生物有真菌、藻类。 * 微生物检验与鉴定异同 相似之处 ：菌株的分离、纯化 、性状测定等 区别 1. 工作目的 鉴定（分类）：对分离物进行识别，并按相似性或同源性界 定该分离物在分类系统中的地位。 鉴定 （检验）：分离物在检验对象中是否存在是问题的关键， 而该菌的分类地位并不重要。 2. 诊断 (鉴定 )方案是在分类研究的基础上制定出来的。 3. 检验过程中 ,多采用特有的鉴别特征或试验 ,而无须象分类 鉴定工作那样 ,需对分离物进行全面的分析。 检验中，多选用形态和生理生化等表型特征。必要时才借助 一些较复杂的方法： DNA 碱基组成、核酸同源性等 。 * 快速鉴定： 在对样品进行检测的过程中，无须进行微生物的分离纯 化或常规试验， 而利用有关技术， 在几小时乃至几十分钟内从混杂样 品中直接确定是否存在某种活菌、微生物产物或抗原成分的鉴定方 法。 革兰氏染色 染色原理 化学学说： G+ 菌与核蛋白镁盐、 多糖形成复合物 （G+—核 蛋 白镁盐 — 多糖），可与结晶紫 — I2 牢固结合。 等电点学说： G+ （pI = 2 ~ 3）＜ G- （pI = 4 ~ 5） 中性溶液中，电荷数 G+ ＞ G- 菌，易与碱性染料结 合，不易脱色。 渗透性学说：与菌体细胞壁结构有关。 G+的细胞壁是肽聚 糖形成的网状结构； G－细胞壁成分是肽聚糖含量的， 主要是脂壁酸， 结构松散。 分离 1） 稀释分离 （经典、标准分离法） —— 适用于饮水、牛乳、植物病原菌、尿液等样本 稀释度 10-1 ~ 10-5 2） 划线分离（曲线划线法） （常用技术） 分区划线法：多用于含菌量较多的样品。 连续划线法：含菌量不多的样本或培养物 一般接种方法 (5 种） 1）斜面接种法 (沾菌和挑菌 ) —— 用于移植纯种，鉴定或保存菌种之用 2 ）穿刺接种 —— 多用于双糖、半固体、明胶等培养基的接种 双糖铁 ：直刺至管底； 细菌动力观察： 不穿 至管底 3） 液体接种 :挑菌或稀释接种 —— 单糖发酵试验 4 ）倾注平板接种法 :融化 45-50℃时混菌接种 —— 抑制真