临床微生物学检验之药敏.pdfVIP

临床微生物学检验 一、纸片扩散法 又称 Kirby-Bauer （K-B）法，由于其在抗菌药物的选择上具有灵活性，且花费低廉，被 WHO推 荐为定性药敏试验的基本方法，已在临床广泛使用。 （- ）实验原理 将含有左量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上， 纸片中所含的药物吸收琼脂 中的 水分溶解后不断向纸片周伟 I 扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周羽抑菌浓度范国内测试 菌的 生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测左 药物的 敏感程度，并与该药对测试菌的 MIC呈负相关。 （二）培 养基和抗菌药物纸片 1、 抗菌药物纸片 选择直径为 6. 35mm, 吸水量为 20M的专用药敏纸片，用逐片加样或侵 泡 方法使每片含药量达规左所示。含药纸片密封贮存 2~8°C 或 - 20°C 无霜冷冻箱内保存， B- 内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存 , 且不超过一周。使用前将贮存容器移至室温平衡「 2 小 时，避免开启贮存容器时产生冷凝水。 2 、培养基 水解酪蛋白 （Mueller-Hinton,M-H ）培养基是 CLSI 采用的兼性厌氧菌和需氧 菌药 敏试验标准培养基， pH为 7.2~7.4, 对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、 淋病奈瑟 菌、链球菌等需加入补充物质。琼脂厚度为 4mm。配置琼脂平板当天使用或置 塑料密封袋 中 4°C 保存，使用前应将平板 M35°C 温箱孵育 15 分钟，使英表而干燥。 （三）实验方法 实验菌株和标准菌株接种采用直接菌落法或细菌液体生长法、用 0. 5 麦氏比浊管标准的菌 液 浓度，校正浓度后的菌液应在 15 分钟内接种完毕。操作步骤如下： 1、 接种用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表而均匀涂抹 接种 3 次，每次旋转平板 60 度，最后沿平板內缘涂抹一周。 2 、 贴抗菌药物纸片 平板置室温下干燥 3 飞分钟，用纸片分配器或无菌银子将含药纸片紧 贴于 琼脂表面，各纸片中心相距》 24mm,纸片距平板內缘》 15mm,纸片贴上后不可再移 动，因为 抗菌药物会自动扩散到培养基内。 3 、 孵育 置 35°C 孵育箱 16~18 小时后阅读结果，对苯哇西林和万古霉素敏感等应孵育 24 小 时。 （四）结 果判断和报告 用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径（抑菌圈的边缘应是无明显细菌生长的区域），先量取质 控 菌株的抑菌环直径，以判断质控是否合格：然后虽 : 取试验菌株的抑菌环直径。根据 CLSI 标准， 对量取的抑菌圈直径作出“敏感”、“耐药”、“中介”的判断。 （五）质 量控制 对于肠杆菌科细菌， M-H琼脂，生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准的细菌浓 度， 35°C+- 2°C, 空气， 16~18 小时观察结果，质控菌株推荐为大肠埃希菌 ATCC25922,大肠 埃希菌 ATCC35218 （为监控 B- 内酰胺酶 / B- 内酰胺抑制剂纸片用）：对于铜绿假单胞菌 ATCC35218；对 于匍萄球菌属细菌， 16~18 小时观察结果， 测苯卩坐西林、 甲氧西林、 蔡夫西 林和万古霉素需 24 小时，试验温度超过 35°C