第七章遗传重组.pptxVIP

第七章 基因重组;第一节 基因重组概述;二、分子内重组类型;转座重组：不需要同源序列。调节这一过程的蛋白(转座酶、整合酶)识别重组分子中短特异性序列； 异常重组(illegitimate recombination)：发生于非同源序列之间，是细胞异常作用的结果。包括复制中不正常末端连接，链滑动或成环。 人工重组：体外使用纯化的酶和底物进行的DNA连接。;大肠杆菌四种遗传重组的一般特征;第二节 同源重组(homologous recombination);一、同源重组的基本特征;二、同源重组的两个基本功能;Holliday模型：重组发生在异源双链间，涉及DNA链的打断和重新连接产生新的分子； Meselson-Radding模型： DNA双链断裂引发重组，在DNA修复中重组发生。;1、同源重组与减数分裂;2、Holliday重组模型;4）Holliday中间体：切口封闭形成Holliday中间体(4,5)； 5）分支迁移：两条DNA分子间的交叉点可以沿DNA移动；移动实际上是两条DNA分子间交叉的同源单链互相置换的结果(6); 6）Holliday中间体旋转变构(8 9)；;7）Holliday中间体拆分（二次切断），可以有两种情况： Holliday中间体二次切割发生在原断裂的两条单链上，称为非交换型重组，双链中存在异源区域(图10, 11, 12)； Holliday中间体二次切割发生在另外两条单链上，称为交换型重组(图10’, 11’, 12’)。;Holliday模型;3、 Meselson-Radding双链断裂模型 ;4、环状DNA同源重组过程;5、同源重组模型的实验验证;四、细菌的重组;转化机制;2、细菌接合中的重组;F因子插入模型;3、细菌转导中的重组;五、同源重组过程的酶学;3、与重组有关的活性;4、RecA蛋白的作用方式;;RecA蛋白促进的各类DNA分子间的联会;（二）RecBCD蛋白质;RecBCD酶在含有游离双螺旋端的DNA分子上起始其解旋作用。它结合在双螺旋游离端，利用ATP的能量沿双螺旋前进，经过处DNA解旋又复旋。 RecBCD酶在Chi位点上促进重组作用。Chi核苷酸顺序是5’GCTGGTGG3’，是重组频率较高的部位。当解旋的DNA链上有Chi位点时，RecBCD酶出现特异的核酸酶活性，将靠近Chi处（约离Chi 4-6碱基处）的单链切断。 ;;;（三）RecE和RecF蛋白质;第三节 位点特异性重组(site-specific recombination);一、位点特异性重组的一般特点;二、?噬菌体的整合;2、位点特异性重组中??酶;3、?噬菌体DNA的重组——整合与切除;?噬菌体整合的分子机制;ＥＮＤ