第十二章基因工程与蛋白质工程.pptxVIP

第十二章基因工程与蛋白质工程;第一节 生物工程概述;一、生物工程的概念及研究技术;二、生物工程在现代工、农、医领域中的应用; 基因工程包括DNA重组技术和其他使基因结构得以定向改造的技术。本节主要介绍DNA重组技术，大体上包括下列5个步骤。;DNA重组的 技术路线;第二节 基因工程;一、目的基因的获得;1. 限制性内切酶;限制性内切酶的命名 ;限制性内切酶切割DNA的方式 ;a.从识别序列的中间切开;b.在识别序列对称轴的左右两方进行切割;c.在识别序列对称轴的右边（5’-3’链）和对称轴左边（3’-5’链）切开;2.取得目的基因的方法 ——分离法及合成法;二、基因载体; 质粒是一种环状双链的DNA分子。自身在细菌细胞中能不断复制繁殖。研究比较深入的质粒有大肠杆菌的性因子（F因子）、大肠杆菌素因子和抗药因子等;质粒的作用;目前所使用的质粒;pBR322质粒的结构; 以噬菌体或病毒为载体，将所需基因或含有此基因的DNA片段转移给受体细胞的过程，称为转导。 我们常常采用?噬菌体作为基因工程的载体，其一它的遗传结构与功能知道得比较清楚；其二是易于使细胞感染，易于使外源DNA导入宿主细胞。 ;以?噬菌体为载体进行DNA克隆;三、重组DNA的筛选及表达;1.转化——带有目的基因的载体进入受体细胞;?噬菌体感染大肠杆菌的途径;;2.筛选——从大量受体细胞选出带有重组体 的细胞;（1）插入失活法;pBR322质粒结构;（2）放射性探针检测法;;（3）R-环检测法;（4）免疫测定法;;Southern和Western印迹法;3.表达——外源DNA在受体细胞中的转录和翻译;第三节 蛋白质工程;一、蛋白质工程的概念 蛋白质工程(protein engineering)：通过改造与蛋白质相应的基因中的碱基顺序，或设计合成新的基因，将它克隆至受体细胞中，通过基因表达而获得具有新的特性的蛋白质技术;蛋白质工程 举例：;二、蛋白质工程的一般技术 1、蛋白质工程的理论设计——蛋白质工程的前提 2、点突变法——基因修饰的方法 （1）基因的全化学合成 （2）基因直接修饰法 （3）盒式突变技术 ;三、蛋白质工程的应用 1、蛋白质工程酶—酶特性的改造 （1）改变酶的催化活性 （2）改变酶的底物专一性 （3）提高酶的稳定性 （4）酶的反应特性改变 （5）产生新酶 2、合理药物设计—蛋白质工程用于新药研制 譬如：胰岛素原的人工合成;胰岛素原的人工合成;;