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邻苯二甲醛消毒液杀灭微生物作业规程
1、目的
验证本公司邻苯二甲醛消毒液杀灭微生物效果，确保出厂产品符合标准要求。
2、范围
本公司之生产邻苯二甲醛消毒液杀灭微生物之效果验证
3、作业程序
3.1试剂
磷酸盐缓冲液 （PBS，0.03mol/L，pH7.2）
无水磷酸氢二钠 2.83g
磷酸二氢钾 1.36g
蒸馏水加至 1000mL
将各成分加入到 1000ml 蒸馏水中，待完全溶解后，调 pH 至 7.2～7.4，
于 121℃ 压力蒸气灭菌 20min备用。
有机干扰物
牛血清白蛋白 30g
蒸馏水 1000mL
溶解后用微孔滤膜(孔径为0.45μm)滤过除菌，冰葙保存备用。
稀释液：胰蛋白胨生理盐水溶液（TPS）。
胰蛋白胨 1.0g
氯化钠 8.5g
先用 900ml 以上蒸馏水溶解，并调节pH 值在 7.0±0.2，最终用蒸馏水加至
1000ml，分装后，经121℃压力蒸汽灭菌后使用。
标准硬水(硬度342mg/L)
氯化钙(CaCl)2 0.034g
氯化镁(MgCl ·6H O)2 2 0.139g
蒸馏水加至 1000mL
营养琼脂、沙堡琼脂、甘氨酸、吐温80、卵磷脂、金黄色葡萄球菌ATCC6538、
大肠杆菌ATCC8099、白色念珠菌ATCC10231、铜绿假单胞菌ATCC15442、枯
草杆菌黑色变种芽孢ATCC9372 悬液。
3.2设备
电动混合器、高压灭菌器、恒温水浴锅、超净工作台、恒温培养箱、刻度吸管、
试管、培养皿。
3.3实验步骤
3.3.1 消毒液使用邻苯二甲醛消毒液原液。
8 8
3.3.2 配制实验用菌悬液，浓度为1×10 cfu/ml～5×10 cfu/ml 。
3.3.3 取消毒试验用无菌大试管，先加入0.5ml试验用菌悬液，再加入0.5ml有机
干扰物质，混匀，置 20℃±1℃ 水浴中 5min后，用无菌吸管吸取上述浓度消毒
液 4.0 ml 注入其中，迅速混匀并立即记时。
3.3.4 待试验菌与消毒剂相互作用至各预定时间，分别吸取0.5ml试验菌与消毒剂
混合液加于 4.5ml 经灭菌的中和剂中，混匀。
3.3.5 各管试验菌与消毒剂混合液经加中和剂作用10min 后，分别吸取 1.0ml样
液，按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管样液接种2个平皿。如平板上生长
的菌落数较多时，可进行系列10倍稀释后，再进行活菌培养计数。
3.3.6 同时用稀释液代替消毒液，进行平行试验，作为阳性对照。
3.3.7 所有试验样本均在 37℃ 温箱中培养，对细菌繁殖体、真菌培养48h 观察
最终结果；对细菌芽孢需培养 72h 观察最终结果。
3.3.8 试验重复3次，计算各组的活菌浓度（cfu/ml ），并换算为对数值（N ），
然后按下式计算杀灭对数值：
杀灭对数值(KL)＝对照组平均活菌浓度的对数值(N)-试验组活菌浓度对数值
0
（N ）
x
计算杀灭对数值时，取小数点后两位值，
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