核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法剖析.pdfVIP

核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 50 ×TAE Buffer (pH8.5) 组份浓度 2 M Tris- 醋酸， 100 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1. 称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 Tris 242 g Na2EDTA·2H2O 37.2 g 2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加入 57.1 ml 的乙酸，充分搅拌。 4. 加去离子水将溶液定容至 l L 后，室温保存。 10 ×TBE Buffer (pH8.3) 组份浓度 890 mM Tris- 硼酸， 20 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1. 称量下列试剂，置于 l L 烧杯中。 Tris 108 g Na2EDTA·2H2O 7.44 g 硼酸 55 g 2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加去离子水将溶液定容至 l L 后，室温保存。 10 ×MOPS(3- 吗啉基丙磺酸 )Buffer 组份浓度 200 rnM MOPS ，20 mM NaOAc ，10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1. 称 41.8 g MOPS ，置于 1 L 烧杯中。 2. 加约 700 ml DEPC 处理水，搅拌溶解。 3. 使用 2 N NaOH 调节 pH 值至 7.0。 4. 再向溶液中加入下列试剂。 1 M NaOAc(DEPC 处理 ) 20 ml 0.5 M EDTA(pH8.0)(DEPC 处理 ) 20 ml 5. 用 DEPC 处理水将溶液定容至 1 L 。 6. 用 0.45 m 滤膜过滤除去杂质。 7. 室温避光保存。 注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。 溴乙锭 (10 mg/ml) 组份浓度 10 mg/ml 溴乙锭 配制量 100 ml 配制方法 1. 称量 1 g 溴乙锭，加入到 100 ml 容器中。 2. 加入去离子水 100 ml ，充分搅拌数 h 完全溶解溴乙锭。 3. 将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。 4. 溴乙锭的工作浓度为 0.5 g/ml 。 注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。 Agarose 凝胶 配制方法 1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液 (通常是 0.5 ×TBE 或 1 ×TAE) 。 2. 根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。 3. 加入一定量的电泳缓冲液 (总液体量不宜超过锥形瓶的 50%容量 )。 注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 4. 在锥形瓶的瓶封上保鲜膜， 并在膜上扎些小孔，