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铜绿假单胞菌检查 1 简述 铜绿假单胞菌（ Pseudomonas aeruginosa ），习称绿脓杆菌，为假单 胞菌属菌种， 广泛分布在土壤， 水及空气中， 人和动物的皮肤、 肠道、 呼吸道均有存在， 故可通过环境和生产的各个环节污染药品， 本菌是 常见的化脓性感染菌、在烧伤、烫伤、眼科及其他外科疾患中长引起 继发感染， 由于本菌对许多抗菌药物具有天然的耐药性， 增加了治疗 的难度。国内外药典均将铜绿假单胞菌列为检查项目之一。 铜绿假单胞菌按增菌，分离、纯培养、革兰染色、镜检及生化试 验等步骤进行检验。 2 仪器、设备和用具（见大肠埃希菌 2）。 3 试液、指示液 3.1 0.9% 无菌氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液 [ 附录 3.1 ，3.3] 。 3.2 pH7.0 无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液 [ 附录 3.2] 。 3.3 1% 盐酸二甲基对苯二胺试液 [ 附录 2.1] 。 3.4 盐酸试液 [ 附录 2.12] 。 3.5 氯仿 [ 附录 1.57] 。 4 培养基 4.1 营养肉汤培养基 [ 附录 5.1] 。 4.2 胆盐乳糖（ BL）培养基 [ 附录 5.6] 。 4.3 营养琼脂培养基 [ 附录 5.2] 。 4.4 溴代十六烷基三甲胺 [ 附录 5.14] 。 4.5 绿脓菌素测定用培养基（ POP琼脂） [ 附录 5.26] 。 4.6 明胶培养基 [ 附录 3.27] 。 4.7 硝酸盐胨水培养基 [ 附录 5.28] 。 5 对照用菌液 铜绿假单胞菌 [CMCC（B）10104] 营养琼脂斜面培养物少许，接种至 5ml 营养肉汤培养基内，于 36±1℃培养 18～24h 后，用 0.9%无菌氯 6 化钠溶液稀释至 1:10 ，使对照菌加入量含 10～ 100cfu （一般用量为 0.1ml ），菌数测定在做阳性对照实验用营养琼脂浇碟或平板涂布经培 养后计数确定。 6 操作方法 6.1 供试品的取样量（见细菌、霉菌和酵母菌计数 5.3 ）。 6.2 供试液的制备（见细菌、霉菌和酵母菌计数 7 ）；（大肠埃希菌 6.2 ）。 6.3 增菌培养 取胆盐乳糖培养基 2 份，每份 100ml，1 份加入 1:10 供试液 10ml （相 当于供试品 1g 或 1ml）。另 1 份加入与供试液等量的稀释剂作阴性对 照。于 36℃± 1℃培养 18～24h （必要时可延至 48h）。阴性对照菌应 无军生长。 6.4 分离培养 轻轻摇动上述增菌培养液，以接种环取 1～2 环培养液（如有菌膜应 挑取之），划线接种于溴代十六烷基三甲胺琼脂平板，于 36℃± 1℃ 培养 18～24h。铜绿假单胞菌在该培养基平板上的典型菌落为扁平、 圆形或无定形、 边缘不齐， 光滑湿润，呈灰白色， 周边略呈扩散现象， 在菌落相邻处常有融合现象。 菌落周围常有水溶性蓝绿色素扩散， 使 培养基显蓝绿色， 但亦有不产色素的菌株。 菌落还有粗糙型和粘液型 等，应注意挑选。 6.5 纯培养 供试品分离平板生长 6.4 所述典型菌落或呈疑似菌落时， 以接种针轻