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蛋白质的提取纯化和分析 第一页，共24页。 材料选择和预处理 细胞破碎 蛋白质的粗提 目 录 题目分析 蛋白质的纯化 分析检测 第二页，共24页。 1 题目解析 已知某蛋白的分子量约为17 kDa，等电点3.9~4.1，它能耐一定的高温，在90 °C加热3~4 min后仍然能够保持80%的活性。该蛋白含有较多的疏水性残基，与Ca2+结合后可以暴露它的疏水基团。该蛋白的作用是作为生物体内酶的激活剂。 在钙离子的作用下才能起到暴露疏水集团发挥性能，结合蛋白质基础知识从而可以判断其为钙调蛋白。 第三页，共24页。 材料的选择 TEXT 材料的预处理 成年健康雄性大鼠脑组织20克（比雌鼠体积大，成本较低物种易获得） 将切取的组织用4℃预 冷0.01mol/l的PBS漂洗去血渍，再用滤纸吸干残留的PBS（磷酸盐缓冲液 ） 第四页，共24页。 预处理过的组织 细胞破碎（高速珠磨法） 制备组织细胞悬液（剪碎法） 蛋白质被释放出来 3 3 1 1 2 2 破碎 第五页，共24页。 剪碎法 1.将组织块放入平皿后，加入少量PBS； 2.用眼科剪将组织剪至匀浆状，加入10 ml PBS； 3.用吸管吸取组织匀浆，用200目尼龙网过滤到试管内； 返回 第六页，共24页。 高速珠磨法 破碎机理： 高速珠磨法是一种有效的细胞破碎方法，珠磨机是该法所用的设备，其结构示意图见图（1）。微生物细胞悬