蛋白质的分离纯化.pptVIP

电泳仪 水平电泳槽 垂直电泳槽 第三十页，共41页。 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） 不连续：浓缩胶和分离胶 电泳迁移率决定于所带的净电荷以及分子大小和形状等因素。 + 凝胶 加样 P309 第三十一页，共41页。 巯基乙醇：打开二硫键。 SDS：变性剂，破裂蛋白质分子中的氢键和疏水作用。 SDS以其氢键与蛋白质分子的侧链结合成复合体。 ① 带有很多负电荷——远远超过蛋白质分子原有电荷 ② 改变了蛋白质单体分子的构象：近似雪茄烟形的长椭圆棒， 短轴长度相同，长轴长度随蛋白质的相对分子质量成正比例变化。 迁移率主要取决于蛋白质相对分子量 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS- PAGE） 第三十二页，共41页。 蛋白质的分离纯化 第一页，共41页。 蛋白质的分离纯化 透析和超过滤 超速离心 层析（色谱） (chromatography) 电泳 (electrophoresis) 第二页，共41页。 1 透析和超过滤 P302 第三页，共41页。 2 超速离心 P302 第四页，共41页。 基本原理： 层析由流动相和固定相组成 样品作为流动相流过固定相 各组分在两相中分布程度不同 各成分迁移率不同 分离 3 层析（色谱）（Chromatography） P148 第五页，共41页。