蛋白质组学研究技术进展.pptVIP

等量不同来源的蛋白样品（一般每个样品100ug）经过还原烷基化、胰酶消化成肽段后，分别用带有不同大小报告基团的iTRAQ 试剂进行标记。待标记反应完全之后，将不同报告基团标记的肽段等量混合，利用多维液相色谱对混合肽段进行分离，最终进入质谱进行定性和定量分析。由于标记的肽段的理化性质基本一致，因此不同样品来源的同一肽段将被同时洗脱和离子化。 实验流程 第三十一页，共46页。 在进行一级质谱检测时，不同报告基团标记的同一肽段的分子量一致，在谱图中叠加成一个峰，从而便于质谱仪进行母离子选择。在进入二级质谱检测时，母离子碎裂成一系列的碎片离子及报告离子，碎片离子则可以用于肽段的序列鉴定，产生的报告离子则可用于蛋白的定量分析，通过比较不同分子量大小的报告离子质谱峰强度来对不同样品来源的肽段进行定量比较。 第三十二页，共46页。 第三十三页，共46页。 蛋白质组学研究技术进展 第一页，共46页。 蛋白质组学背景 随着人类基因组计划的完成和对基因组研究的深入，人们认识到单纯依靠基因组信息并不可能完全揭示生命的奥秘。这是因为蛋白质才是生物功能的体现者，所以必需考虑基因编码的蛋白质具有什么功能。 第二页，共46页。 不仅如此，基因在转录和翻译过程中存在转录和翻译水平的调控, 蛋白质往往还要经过剪接、修饰、加工之后，最终才能成为有功能的蛋白质；而且生物体不同组织、不同分化程度