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神经干细胞移植与脊髓损伤修复罗伟 神经干细胞移植与脊髓损伤修复罗伟 众所周知,脊髓损伤(spinal cord in2jury , SCI) 是临床治疗的世界性难题。以往,许多学者曾尝试周围神经移植、胚胎脊髓移植、雪旺细胞移植、大网膜移植及应用神经营养因子治疗脊髓损伤。这些研究虽有很大进展,但都未达到目的。近年,国内外把研究焦点集中到了具有自我复制能力和多向分化潜能的神经干细胞(neural stem cells , NSCs) 上,已取得了一些突破。笔者就脊髓损伤修复和NSCs 移植及应用前景作一简介。 1 脊髓损伤的研究 1. 1 脊髓损伤后的反应 1. 111 脊髓形态学改变:脊髓损伤后,急性阶段出现局部神经元和胶质细胞的死亡、轴突退缩、神经干完整性丧失、溃变、炎症反应等。亚急性和慢性阶段还出现继发性改变,失去轴突的神经元坏死,神经胶质增生和纤维化并导致瘢痕形成及代偿性而非再生性轴突侧索的出芽生长等。 1. 112 细胞及细胞因子变化:中枢神经损伤区存在星形胶质细胞、少突胶质细胞、原始少突胶质细胞、小胶质细胞。这4 种胶质细胞均能抑制轴突的生长。成熟的少突胶质细胞能产生许多重要的抑制性物质,包括NI35 和NI250 (一种髓鞘相关阻断因子) 和髓鞘相关糖蛋白(MAG) ;原始少突胶质细胞能产生抑制性的蛋白多糖NG2 ;值得一提的是,星形胶质细胞在正常情况下和损伤早期,可能有促进轴突再生的作用,但损伤后,也可产生一系列的抑制性蛋白多糖;小胶质细胞受刺激后能产生多种毒素,杀死神经细胞和损伤神经轴索。因此,脊髓损伤区多种不同的抑制性因子及脊髓损伤后发生的创伤性细胞反应,导致了星形胶质细胞分裂并衍化为“瘢痕性”胶质细胞;小胶质细胞和原始少突胶质细胞增殖并移向损伤区,对脊髓的轴突再生极为不利[1 ] 。 112 脊髓损伤的修复机制 哺乳动物脊髓是自然界长期进化的产物,具有复杂的结构和功能。一般说来,成年哺乳动物脊髓的神经细胞是体内高度分化的细胞,已经失去有丝分裂的能力。因此,脊髓损伤后修复的途径是: (1) 残留的神经细胞的轴突残端通过终末出芽或侧支出芽的形式再生,并延伸至相应的靶细胞,形成突触连接,重建相应的神经环路,从而恢复或部分恢复对靶细胞的神经支配。研究结果显示,损伤脊髓的修复,不仅与神经元本身的内在因素有关,而且与周围的环境因素及来自靶区的特殊信号有关[2 - 3 ] 。(2)近年研究还发现,利用NSCs 移植补充、替代丧失的神经元,可部分重建新的神经环路,恢复部分神经功能。 2 NSCs 移植 211 NSCs 研究现状NSCs 的主要特征为未分化,能自我更新,具有分化成神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞的多种分化潜能。目前,人们已经能够从胚胎和成年啮齿动物及人的脑和脊髓内分离出具有向神经元和神经胶质细胞分化潜能的干细胞,并在体外培养成功。成年NSCs 多位于脑和脊髓中轴部位,难以大量取材,且目前无法对NSCs的增殖分化进行精确的调控,人们曾设想从相对易获取的组织如骨髓中获得NSCs。最近Castro 等[4 ] 做了这方面的尝试,但未获成功。他们把Rosa26 小鼠骨髓基质中的造血干细胞植入致死剂量照射的C57B1/ 6 小鼠体内,数月后采集受体脑组织、脊髓进行X - gal 组织细胞化学分析,但未能发现NSCs。212 NSCs 移植治疗脊髓损伤由于NSCs 具有独特的生物学特性,利用NSCs 移植对脊髓损伤部位实行细胞替代和基因转移治疗,是当代新发展起来并极有应用前景的脊髓损伤的治疗策略和脊髓损伤治疗研究的焦点。 212. 1 NSCs 移植的时机、方法及疗效评价:关于脊髓损伤后NSCs 移植的时机问题,国内外有不同的报道。Ogawa等[5 ]报告,脊髓损伤后24 h ,损伤处出现急性炎症反应,有神经毒性作用的炎症因子[如白细胞介素- 6 ( IL - 6) 、肿瘤坏死因子( TNF) 等]含量急剧增高,在 这一时期植入NSCs 不能存活。第9 天移植,NSCs 大部存活,并分化成不同类型神经细胞。他们认为,损伤处微环境对NSCs 存活有至关重要的作用。第9 天时,急性炎症已消退,微环境进入修复阶段,有神经生长、营养因子的表达及微血管的形成,有利于移植细胞的存活。也有学者提出,损伤后1 周左右适宜移植。郭家松等[6 ] 则在损伤后立即进行NSCs移植。在移植方式上,多数学者使用微移植技术,即用微管(如汉密尔顿注射系统) 把NSCs 直接注射到损伤处,以尽可能小的量,移植尽可能多的细胞来减少对宿主造成的创伤。也有学者采用了不同的方法。Teng 等[7 ] 设计了一种脊髓仿生物(polymer scaffold