第十章 酶的催化机理.pptVIP

第十章 酶的催化机制 第一页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 提纲 一、酶催化机理研究的主要方法 二、过渡态稳定学说 三、过渡态稳定的化学机制 邻近定向效应 广义的酸碱催化 静电催化 金属催化 共价催化 底物形变 四、几种常见酶的结构与功能 蛋白酶 溶菌酶 第二页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 酶催化机理研究的主要方法 找出保守性的氨基酸残基 三维结构的研究 定点突变 动力学分析 化学修饰 计算机模拟 第三页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 过渡态稳定学说 根据过渡态理论，在任何一个化学反应体系中，反应物需要到达一个特定的高能状态以后才能发生反应。这种不稳定的高能状态被称为过渡态。达到过渡态要求反应物必须含有足够的能量以克服活化能。 1946年Pauling 提出，酶与过渡态的亲和力要比对基态（底物）的亲和力高得多，酶的催化源于其对过渡态的稳定作用。 化学反应的过渡态及 其前后的自由能变化 HA-HB + HC→HA-HB-HC（过渡态）→HB-HC + HA 第四页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 “铁丝酶”催化反应的过渡态稳定机制 第五页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 支持过渡态稳定学说的证据 根据过渡态的结构设计的过渡态类似物可作为酶的强抑制剂，抑制效果远高于竞争性抑制剂。 利用过渡态类似物作为抗原或半抗原，去免疫动物，由此产生的抗体可能有类似酶的催化作用。 第六页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 脯氨酸消旋酶的过渡态及其过渡态类似物抑制剂 第七页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 免疫动物产生抗体 水解 筛选 抗体酶 可卡因 催化可卡因水解的抗体酶的制备 第八页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 过渡态稳定的化学机制 与酶催化相关联的过渡态稳定是酶活性中心结构和反应性以及活性中心与结合底物之间的相互作用的必然结果。酶充分使用一系列的化学机制来实现过渡态的稳定并由此加速反应。它们包括： 邻近定向效应 广义的酸碱催化 静电催化 金属催化 共价催化 底物形变 第九页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 邻近定向效应 邻近定向效应是指两种或两种以上的底物（特别是双底物）同时结合在酶活性中心上，相互靠近（邻近） ，并采取正确的空间取向（定向） ，这样大大提高了底物的有效浓度，使分子间反应近似分子内反应从而加快了反应速度。 底物与活性中心的结合不仅使底物与酶催化基团或其它底物接触，而且强行“冻结”了底物的某些化学建的平动和转动，促使它们采取正确的方向，有利于键的形成。 第十页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 广义的酸碱催化 广义的酸碱催化是指水分子以外的分子作为质子供体或受体参与催化，这种机制参与绝大多数酶的催化。蛋白质分子上的某些侧链基团（如Asp、Glu和His）可以提供质子并将质子转移到反应的过渡态中间物而达到稳定过渡态的效果。如果一个侧链基团的pKa值接近7，那么该侧链基团就可能是最有效的广义的酸碱催化剂。His残基的咪唑基就是这样的基团，因此它作为很多酶的催化残基。 第十一页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 广义的碱催化 广义的酸催化 广义的酸、碱催化 第十二页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 pH 和缓冲溶液浓度对特定酸碱催化和广义酸碱催化的影响 第十三页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 溶菌酶Glu35的广义酸催化 第十四页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 核糖核酸酶A的广义酸碱催化 第十五页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 静电催化 活性中心电荷的分布可用来稳定酶促反应的过渡态，酶使用自身带电基团去中和一个反应过渡态形成时产生的相反电荷而进行的催化称为静电催化。 有时，酶通过与底物的静电作用将底物引入到活性中心。 第十六页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 溶菌酶Asp52的静电催化 第十七页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 Glu35和Asp52分别所起的广义酸催化和静电催化，解释了溶菌酶的活性与pH之间的关系以及它的最适pH pH对溶菌酶活性的影响 第十八页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 金属催化 近三分之一酶的活性需要金属离子的存在，这些酶分为两类，一类为金属酶，另一类为金属激活酶。前者含有紧密结合的金属离子，多数为过渡金属，如Fe2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+、Mn2+或Co3+，后者与溶液中的金属离子松散地结合，通常是碱金属或碱土金属，例如Na+、K+、Mg2+或Ca2+。 金属离子以5种方式参与催化： 作为Lewis酸起作用 与底物结合，促进底物在反应中正确定向 作为亲电催化剂，稳定过渡态中间物上的电荷 通过价态的可逆变化，作为电子受体或电子供体参与氧化还原反应 酶结构的一部分 第十九页，编辑于星期一：十八点 四十五分。 碳酸酐酶的金属催化机制 第二十页，编辑于星