33株抗心肌肌钙蛋白T_cTnT_的单克隆抗体制备_鉴定及应用_胡月红.pdfVIP

1694 生 物 工 程 学 报 胡月红 等/33 株抗心肌肌钙蛋白 T (cTnT) 的单克隆抗体制备、鉴定及应用 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn December 25, 2016, 32(12): 1694−1703 DOI: 10.13345/j.cjb.160125 ©2016 Chin J Biotech, All rights reserved 生物技术与方法 33 T (cTnT) 1* 2* 1 1 2 2 2 2 胡月红 ，陈自敏 ，陈宇翔 ，杨映晖 ，魏淑英 ，宋浏伟 ，周国梁 ，葛胜祥 1 361022 2 361102 , , , . 33 T (cTnT) . , 2016, 32(12): 1694–1703. Hu YH, Chen ZM, Chen YX, et al. Development, identification and application of 33 monoclonal antibodies against cardiac troponin T. Chin J Biotech, 2016, 32(12): 1694–1703. 摘 要 : 旨在制备抗心肌肌钙蛋白T (cTnT) 的单克隆抗体 (mAb) ，对单抗进行初步评价鉴定，并建立 (cTnT) 的化学发光定量检测试剂。首先利用外购的cTnT 抗原免疫BALB/c 小鼠，利用常规mAb 制备技术和间接ELISA 法筛选mAb ，以表达和合成的cTnT 片段对筛选到的 mAb 进行表位鉴定。使用双抗体夹心ELISA 方法筛选检 测cTnT 抗原的配对mAb ，并建立cTnT 全自动化学发光定量检测试剂。使用220 例临床标本评价该试剂与罗 氏试剂的检测一致性，另外使用238 例临床样本和784 例体检人群样本评价该试剂的临床应用。我们成功筛选 到33 株稳定分泌抗 cTnT 抗体的杂交瘤细胞株，并对单抗的表位进行初步鉴定。我们筛选到能检测 10 pg/mL cTnT 抗原的配对 mAb E16H8 和 C8G11 ，并使用该配对研制出全自动化学发光定量试剂。该试剂与罗氏试剂 相关系数r 达到0.959 9 ，检测一致率95% ，利用该试剂盒检测临床样本灵敏度为97.5% ，特异性为99.15% ， 99%体检人群的cTnT 浓度分布小于0.080 6 ng/mL ，符合WHO 对急性心肌梗死的定义标准。综上，初步建立 了cTnT 诊断优势表位单抗，并利用这些优势表位的单抗建立全自动管式化学发光定量检测试剂，与罗氏试剂 检测结果符合率高。 : 心肌肌钙蛋白T (cTnT) ，急性心肌梗死 (AMI) ，单克隆抗体，化学发光 Received: March 29, 2016; Accepted: May 16, 2016 Supported by: Xiamen Science and Technology Program (No. 3502. Corresponding author: Shengxiang Ge. Tel/Fax: +86-592-6536555; E-mail: sxge@ * These authors contributed equally to