CK_MB特异性单抗的制备方法及其应用_陈自敏.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 陈自敏 等/CK-MB 特异性单抗的制备方法及其应用 141 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn January 25, 2017, 33(1): 141−150 DOI: 10.13345/j.cjb.160216 © 2017 Chin J Biotech, All rights reserved ·生物技术与方法 · CK-MB 特异性单抗的制备方法及其应用 1 1 2 2 2 2 1 1 陈自敏 ，周国梁 ，徐伟玲 ，郑小红 ，童勋章 ，柯起沈 ，宋浏伟 ，葛胜祥 1 厦门大学 生命科学学院 国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，福建 厦门 361102 2 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司，福建 厦门 361026 陈自敏, 周国梁, 徐伟玲, 等. CK-MB 特异性单抗的制备斱法及其应用. 生物工程学报, 2017, 33( 1): 141– 150. Chen ZM, Zhou GL,Xu WL, et al. Development and application of CK-MB specific monoclonal antibodies . Chin J Biotech, 2017, 33( 1): 141– 150. 摘 要: 本研究拟建立肌酸激酶同工酶MB (CK-MB) 特异性单克隆抗体 (mAb) 的研制方法，对抗CK-MB 单 抗进行评价分类及性质鉴定，并初步建立 CK-MB 定量检测试剂。以CK-MB 抗原免疫BALB/c 小鼠，利用常 规单抗制备技术，使用间接和捕获ELISA 差异筛选法筛选单抗。利用肌酸激酶同工酶 (CK-MM/BB/MB) 抗原 对所制备单抗的抗原识别表位进行鉴定，另通过免疫印迹法及合成CK-MM 、CK-BB 差异性的线性表位肽鉴定 对所制备的单抗进行评价分类。使用双抗体夹心 ELISA 方法筛选检测CK-MB 抗原的配对mAb ，并初步建立 CK-MB 定量检测试剂。使用74 例临床标本初步评价该试剂与罗氏试剂的检测一致性。最终，我们成功筛选到 22 株稳定分泌抗 CK-MB 抗体的杂交瘤细胞株，这些单抗可以分为线性、偏构象的 CK-MB 和 CK-MM 或者 CK-BB 交叉的单抗以及与CK-MB 特异反应的偏构象型单抗，并使用偏构象型单抗研制出CK-MB 定量检测试 剂，该试剂与罗氏试剂相关系数r 达到0.930 9 。综上所述，本研究建立了研制CK-MB 偏构象型特异性单抗的 筛选方法，通过对所筛选的单抗进行分析鉴定并建立了CK-MB 定量检测试剂，与罗氏试剂检测结果符合率高。 : 肌酸激酶同工酶 MB (CK-MB) ，急性心肌梗死 (AMI) ，单克隆抗体，构象型单抗，捕获法 Received: May 31, 2016; Accepted: November 24, 2016 Supported by: Xiamen Science and Technology Program (No. 3502. Corresponding author: Shengxiang Ge. Tel/Fax: +86-592-6536555; E-mail: sxge@ 厦门市科技计划 (No. 3502 资助。 网络出版时间：2016- 12-09 网络出版地址：/kcms/detail/11.1998.Q1525.001.html 142 ISSN 1000-3061 CN 11- 1998/Q Chin J Biotech January 25, 2017 Vol.33 No. 1 Development