Shewanella haliotis BP-1海藻酸裂解酶基因的克隆表达.pdfVIP

广 西 科 学 G u a n g x i S c ie n c e s 2 0 1 6 ，2 3 ( 3 ) : 2 2 8 〜 233 网络优先数字出版时间 ：201 飊0713 【DOI】1 0 .1 3 6 5 6 / k i.g x k x 003 网络优先数字出版地址 ：h tp : //w w w . cnki. net/kcrns/cletail/4 5. 1206. G3. 0857. 006. html Zm/W/s BP- 1 海 藻 酸 裂 解 酶 基 因 的 克 隆 表 达 * Gene Cloning and Expression of Alginate Lyase from Z a / o / BP-1 黄 桂 媛 \ 温顺华2 ，李 锋 3，卢明倩 \ 王 巧 贞 \ 廖 威 4，黄庶识 H U A N G G u iy u an 1 ，W E N S h u n h u a 2 ，L I F e n g 3 ， L U M ingqian1 ， W A N G Q iaozhen 1， L IA O W ei4 , H U A N G S h u sh i1 (1.广西科学院生物物理实验室，广 西 南 宁 530007;.厦门万泰凯瑞生物技术有限公司，福建厦 门 361003 ; . 黔南州民族师范学院化学化工学院，贵 州 都 匀 558000;.广西职业技术学院，广 西南宁 530226) (1. Lab of Biophysics ? Guangxi Academy of Sciences ? Nanning, Guangxi ? 530007, China; 2. Xia­ men Innodx Biotech Co . Ltd. ? Xiamen, Fujian ,361003? China; 3. School of Chemistry and Chem ­ ical Engineering, Qiannan Normal College for Nationalities, Duyun , Guizhou, 558000, China； 4. Guangxi Vocational and Technical College?Nanning,Guangxi 530226?China) 摘 要 ：【目的】了 解 海 洋 细 菌 仏 B P -1中海藻酸裂解酶降解海藻酸钠的生物活性。【方法】应用基 因克隆和大肠杆菌异源表达技术，过量表达海藻酸裂解酶，将 粗 酶 液 通 过 D E A E S e p h a ro s e F F 柱分离纯化后检 测其酶活性。【结果】从 仏 B P -1菌株的基因组 D N A 中克隆得到一个大小为2 1 5 7 b p 的海藻酸裂解酶基 因 A 1 7 S ，该基因编码的海藻酸裂解酶 A lg l7 S 属 于 P L 1 7家族的蛋白，大 小 为 79 726 D a，其 中 包 括 N 端 2 6 个 氨基酸的信号肽，与 S a c c /m r o /a ^ ^ tiegratians 2 4 0 菌 株 产 生 的 海 藻 酸 裂 解 酶 A lg l7 C 具 有 高 度 同 源 性 ，相似 性 为 5 2 %。经纯化后获得的重组酶 A lg l7 S 和 A s n A lg l7 S (N 端 不 含2 6 个氨基酸的信号肽）均具有降解海藻酸 钠的活性，但 A s n A lg l7 S 对海藻酸钠的催化活性比 A lg l7 S 高 ，其 酶 比 活 力 高 达 9 635 U /m g。【结论】重组海藻 酸裂解酶 A s n A lg l7 S 兼 具 高 表 达 水 平 及 高 酶 活 性 ，是 进 一 步 研 究 海 藻 酸 盐 糖 化 和 生 物