第一节 免疫标记技术的基本概念.pptVIP

1、免疫测定技术 2、免疫组化技术 按测定用途划分的类型 * 谢谢欣赏 2021-5-18 第二节 酶联免疫吸附试验 一、ELISA技术的原理与方法 二、 ELISA技术的操作注意要点 * 谢谢欣赏 2021-5-18 ELISA技术的原理与方法 间接法 夹心法 竞争法 * 谢谢欣赏 2021-5-18 间接法 * 谢谢欣赏 2021-5-18 夹心法 * 谢谢欣赏 2021-5-18 竞争法 * 谢谢欣赏 2021-5-18 酶标仪 * 谢谢欣赏 2021-5-18 酶标仪 * 谢谢欣赏 2021-5-18 ELISA技术的操作注意要点 试剂器材 操作环节 适宜工作浓度 * 谢谢欣赏 2021-5-18 谢谢观赏 * 谢谢欣赏 2021-5-18 第一节 免疫标记技术的根本概念 一、免疫标记与标记免疫的概念 二、常用的免疫标记物质 * 谢谢欣赏 2021-5-18 免疫标记与标记免疫 免疫标记技术： 标记物与免疫活性物质的联接技术 标记免疫技术： 以标记免疫物质检测相应靶物质的技术 * 谢谢欣赏 2021-5-18 常用的免疫标记物质 类别 标记物 用途 荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定 放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I 酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定 化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定 金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定 * 谢谢欣赏 2021-5-18 第二节 酶标记技术 一、常用标记方法 二、标记免疫物的别离与鉴定 * 谢谢欣赏 2021-5-18 常用标记方法 1、常用酶 辣根过氧化物酶〔HRP〕 碱性磷酸酶〔AP〕 2、标记方法 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法 * 谢谢欣赏 2021-5-18 戊二醛交联法 (一步法〕 抗体-NH2 + COH-〔CH2〕3-COH + NH2-酶 抗体-NH2 =CH-〔CH2〕3-CH = NH2-酶 抗体-NH2 =CH-〔CH2〕3-CH = NH2-抗体 酶-NH2 =CH-〔CH2〕3-CH = NH2-酶 * 谢谢欣赏 2021-5-18 戊二醛交联法〔二步法〕 COH-〔CH2〕3-COH + NH2-酶 抗体-NH2 + CHO-〔CH2〕3-CH = NH2-酶 抗体-NH2 =CH-〔CH2〕3-CH = NH2-酶 * 谢谢欣赏 2021-5-18 过碘酸盐氧化法 O O O O O O NaaaIO4 O O OH O O OH OH + NH2抗体 O O O N N 抗体 抗体 H2O N 抗体 NaaaBH4 Schiff碱 酶-五炭糖环 * 谢谢欣赏 2021-5-18 标记免疫物的别离与鉴定 1、别离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析 2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度 * 谢谢欣赏 2021-5-18 第三节 荧光标记技术 一、常用标记方法 二、标记免疫物的别离与纯化 * 谢谢欣赏 2021-5-18 常用标记方法 1、荧光素的概念 2、生物标记荧光素的要求 3、常用荧光素标记原理与方法 * 谢谢欣赏 2021-5-18 生物标记荧光素的要求 1、具有与蛋白质共价结合的能力 2、荧光效率高 3、能与背景物质形成鲜明比照 4、不影响蛋白质的生物、免疫活性 5、标记方法平安、简便 6、标记物稳定，易保存 * 谢谢欣赏