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激光共聚焦操作步骤 激光共聚焦操作步骤 PAGE 激光共聚焦操作步骤 激光共聚焦操作步骤 细胞爬片洗3遍PBS，洗的时候不要太冲，加PBS稍微晃一下就可倒掉，可不用等3~5min。 4%预冷的多聚甲醛固定20min，PBS洗3遍。 %Triton X-100通透10min，PBS洗3遍。 与二抗相同宿主的血清（一般是BSA）封闭30min，PBS洗3遍。 一抗4℃湿盒过夜（一般在六孔板周围加点PBS即可），也可37℃、2h，但前者好一些，PBS洗3遍。 二抗37℃，2h（避光），PBS洗3遍。 DAPI染核（3~5min即可），PBS洗3遍，用滤纸小心的吸去多余的水分。 滴一小滴抗荧光淬灭剂于载玻片上，把盖玻片轻轻的挑出来盖在抗荧光淬灭剂上（注意尽量不要有气泡）然后用指甲油滴在盖玻片的四周（为了固定盖玻片）。 注意事项： 细胞不要满，能清楚看到细胞形态即可，各位老师同学在做的时候，一般24小时左右看一下细胞的状态，不要长满了。 二抗在用之前一定要离心，不然会有很多荧光碎片。 在加二抗和DAPI的过程中注意避光。 染完后如果没加抗荧光淬灭剂要尽快照，因为荧光会淬灭。加了抗荧光淬灭剂，荧光片子要避光保存，保存好的过段时候还能照。