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第二十八页，共44页。 T 磷酸二酯键 A 第二十九页，共44页。 大肠杆菌(EcoRI)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制酶所识别的序列有什么特点? 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个、8个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 第三十页，共44页。 黏性末端 黏性末端 黏性末端：被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 第三十一页，共44页。 高中生物选修三基因工程 高中生物选修三基因工程高中生物选修三基因工程一、基因工程的概念 基因工程是指按照 ，进行严格的设计，并通过 和 技术，赋予生物以新的 ，从而创造出更符合人们需要的新的 和 。DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平获取基因—体外重组—导入基因—表达基因人类需要的新的生物类型和生物产品人们的意愿DNA重组转基因遗传特性生物类型生物产品 第一页，共44页。 一、基因工程的概念 基因工程是指按照 ，进行严格的设计，并通过 和 技术，赋予生物以新的 ，从而创造出更符合人们需要的新的 和 。 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 获取基因—体外重组—导入基因—表达基因 人类需要的新的生物类型和生物产品 人们的意愿 DNA重组 转基因 遗传特性 生物类型 生物产品 第二页，共44页。 二、DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 载体——“分子运输车” 第三页，共44页。 识别某种双链DNA分子特定的核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化而来 1、来源： 2、作用： 3、特点： 4、结果： 片段的末端的形式 黏性末端 平末端 (一）限制性核酸内切酶（限制酶）---“分子手术刀” 特异性----特定序列、特定位点 形成DNA的双链片段 第四页，共44页。 （二） DNA连接酶---“分子缝合针” 1、种类： 2、作用部位： 两类 E·coli DNA连接酶:连接黏性末端 T4 DNA连接酶 ：连接黏性末端和平末端 磷酸二酯键 第五页，共44页。 2、运载体必须具备的条件： （1）具有一个或多个限制酶切点，以便与目的基因连接； （2） 能够在受体细胞中复制并稳定地保存，以便目的基因的遗传； （3）具有某些标记基因，以便进行重组DNA的筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ）； （4）对受体细胞无害； （5） 大小合适，以便提取和体外操作。 1、运载体的作用： （1）将目的基因转移到受体细胞中去； （2）使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传； （3）使目的基因能够表达和发挥作用。 （三） 运载体---“分子运输车” 第六页，共44页。 质粒是基因工程最常用的运载体，它广泛地存在于细菌中，是细菌拟核DNA外能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一。 要对天然质粒进行人工改造 常用的运载体有： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等 第七页，共44页。 1.以下说法正确的是（ ） A、所有的限制酶只识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、DNA连接酶使黏性末段的碱基之间形成氢键 C 练习 第八页，共44页。 2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是（ ） A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 练习 第九页，共44页。 3.有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传性状，培育生物新品种 B、重组DNA的形成在生物体外完成 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、质粒都可作为运载体 D 练习 第十页，共44页。 练习 ①???CTGCA ???