基因工程的常规技术.pptxVIP

第三章 基因工程常规技术（P 32—52）电泳技术杂交技术转化技术PCR 扩增技术文库构建技术测序技术第一节 凝胶电泳技术Electrophoresis 核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴定和纯化DNA或RNA片段；电 泳（electrophoresis)带电物质在电场中向相反电极移动的现象一、琼脂糖凝胶电泳 用琼脂糖凝胶作为支持介质的区带电泳法。 琼脂糖是一种线性多糖聚合物，是从红色海藻中提取而来。在高温水溶液下会溶解，常温下凝固并形成一定大小孔径的惰性介质，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。1、原　理DNA分子的磷酸基团在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下DNA分子向正极泳动琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用琼脂糖的分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。因而就可依据DNA分子的大小使其分离。该过程可以通过把分子量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。溴化乙锭（EB）为扁平状分子，在紫外光照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其荧光强度与DNA的含量成正比。据此可粗略估计样品DNA浓度。 注意事项：EB是致癌物质，切勿用手接触，更不要污染环境。2、琼脂糖凝胶电泳的影响因素1）样品DNA分子大小和分子构型2）琼脂糖浓度p33 取决于所分离DNA片段的大小3）缓冲液TAE、TBE4）电泳条件 电压：3-5V/cm时间：