核酸分子杂交技术.ppt

第三节 核酸杂交探针 化学及生物学意义上探针(probe) 指与特定靶分子发生特异性相互作用, 并可被特殊方法探知分子 抗体-抗原、生物素-抗生物素蛋白、生长因子-受体相互作用 每一个病原体都含有独特核酸片段, 经过分离和标识这些片段就可制备出探针, 用于疾病诊疗等研究 ①同源或部分同源基因组DNA探针 ②总cDNA探针 和 特异cDNA探针 (诊断试剂) ③RNA探针 ④人工合成寡核苷酸探针 (检测点突变和小段碱基的缺失或插入) 一、常见探针类型: 1、按起源及性质划分 2、按标识物划分 ①放射性标记探针 ②非放射性标记探针 4）Southern印迹 指将电泳分离DNA片段转移到一定固相支持物上过程 理想固相支持物应含有特征 ①含有较强结合核酸分子能力 ②不影响与探针杂交反应 ③与核酸分子结合稳定牢靠 ④含有良好机械性能 ?非特异吸附少 常见固相支持物(滤膜) 尼龙滤膜 硝酸纤维素滤膜 叠氮苯氧甲基纤维素滤纸（DBM） 二乙氨乙基纤维素滤膜（DEAE） 特点: 进行核酸杂交时, 滤膜轻易 操作和保留 （与凝胶相比） 滤膜选择 核酸特殊性、分子大小 杂交过程中所包含步骤多寡及敏感性等参数 硝酸纤维素滤膜: 不能滞留小于150bpDNA片段