细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定实验报告.pdfVIP

工业微生物育种实验 细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定 关于菌株的几个概念 ： 野生型菌株 ：从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始状态。 营养缺陷型 ：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力， 只 有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长。 1 原养型 ：营养缺陷型菌株经回复突变或重组后产生的菌株， 其营养要求在表型上 和野生型相同 关于培养基： 基本培养基 （minimal medium，MM）：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培 养基，用 [ －] 来表示。 完全培养基 （complete medium ，CM）：凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要 的天然或半组合培养基。用 [ ＋] 来表示。 补充培养基 （supplemental medium ，SM）：凡只能满足相应的营养缺陷型生长 需要的组全培养基，它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组 成。 摘要 ：本实验选用紫外线为诱变剂， 来诱发大肠杆菌突变， 并用青霉素法淘汰野 生型，逐个测定法检出缺陷型，获得 100#大肠杆菌菌株，最后经生长谱法鉴定 出该菌株为脯氨酸缺陷型。 关键词 ：大肠杆菌 紫外线 营养缺陷型 青霉素 逐个测定法 生长谱法 一、 实验目的 1、了解营养缺陷型突变株选育的原理。 2、学习并掌握细菌氨基酸营养缺陷型的诱变、筛选与鉴定方法。 二、实验原理 筛选营养缺陷型菌株一般具有四个环节： 诱变处理、 营养缺陷性的浓缩、 检出、鉴定缺陷型。 本实验选用紫外线为诱变剂， 来诱发突变， 并用青霉素法淘汰野生型， 逐个 测定法检出缺陷型，最后经生长谱法鉴定细菌的营养缺陷型。 三、实验器材 离心机，紫外线照射箱，冰箱，恒温箱，高压灭菌锅；三角烧瓶，试管， 离心管，移液管，培养皿，接种针 四、实验材料 (一)菌种 E.coli 2 (二)培养基、 1 LB 培养液：酵母膏， 0.5g；蛋白胨， 1g；NaCl ，0.5g；水， 100ml，pH7.2 121℃灭菌 15min 2 2 ×LB 培养液：其它不变，水， 50ml 。 3 基本培养基： 葡萄糖 0.5 g，(NH4) SO 0.1 g，柠檬酸钠 0.1 g，MgSO ·7H O 2 4 4 2 2 4 2 4 0.02 g，K HPO 0.4 g，KH PO 0.6 g，重蒸水 100 mL，pH 7.2，110℃灭菌 20 min。 配固体培养基时需加 2%洗涤处理过的琼脂。全部药品需用分析 纯，使用的器皿 需用蒸馏水或重蒸水冲洗 2~3 次。 4 无 N 基本液体培养基： 2 4 2 4 2 4 2 K HPO ,0.7g；KH PO ,0.3g; 柠檬酸钠 3H O,0.5g；MgSO 7H O,0.01g; 葡萄糖 2g；水 100ml，pH7.0 110℃灭菌 20min 5 2N 基本培养基： K2 HPO4 ,0.7g ；