细菌营养缺陷型菌株的诱变与筛选.pdfVIP

细菌营养缺陷型菌株的诱变及筛选 摘要 营养缺陷型菌株在杂交育种、研究微生物代谢途径、遗传分析等方面具有重要应用意 义。针对微生物诱变要得到的特定表型效应， 具有不同的筛选方法。 本次实验以紫外线作为 诱变剂， 诱发大肠杆菌的营养缺陷型突变， 过程中用青霉素法浓缩缺陷型， 基本培养基与完 全培养基比对筛选，最后经生长谱法鉴定得到了一株亮氨酸缺陷性大肠杆菌菌株。 关键字 大肠杆菌，营养缺陷型，紫外诱变，筛选，生长谱鉴定 用某些物理因素或化学因素处理细胞， 使其基因突变， 丧失合成某一物质（如氨基酸、 维 生素、核苷酸等）的能力，这样从野生型经诱变筛选得到的菌株，称为营养缺陷型。在营养 上表现某种缺陷的菌株， 必须在培养基中加入某种有机营养成分后才能够正常生长。 突变前 的菌株称为野生型菌株， 或称为原养型菌株。 能够满足野生型生长的最低营养成分的合成培 养基， 叫做基本培养基。 能够满足营养缺陷型菌株生长的培养基，叫做完全培养基。 不同的 微生物有不同的营养要求，因此基本培养基也各不相同。 营养缺陷型菌株， 在生产实践中可作为杂交育种和发酵核苷酸、 氨基酸等中间代谢产物的出 发菌株或生产菌株， 在遗传分析中也作为遗传分析的菌株。 同时， 也是研究微生物代谢途径 的重要材料。 营养缺陷型的筛选一般具有以下几个环节： 诱变处理， 营养缺陷型的检出， 划线复证， 生 长谱鉴定， 缺陷型菌株纯化。 又因处理的细菌所得到的突变菌仍然是很少的部分， 因此必须 采用有效的筛选方法，才能分离得到突变型。 本次实验用紫外线来诱发大肠杆菌基因突变， 并用青霉素法淘汰野生型， 最后经生长谱法 鉴定细菌的营养缺陷型，掌握细菌营养缺陷型诱变及选育方法。 1. 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 实验器材 1ml、200 μl枪尖各一盒、 牙签一瓶、 500ml 锥形瓶、 100ml 锥形瓶、 试管、 7cm 培养皿、 9cm 培养皿、量筒、移液枪、玻璃棒、紫外灯、黑布、恒温培养箱、离心机、涂布棒、电子天平、 酒精灯、接种环等。 1.1.2 实验材料 1.1.2.1 菌株 大肠杆菌 E.coli K 12。 1.1.2.2 培养基 LB 液体培养基： 酵母膏 0.5g ，蛋白胨 1g， NaCl 0.5g ，蒸馏水， 100ml，pH7.2 。 2 ×LB 液体培养基： 酵母膏 0.5g ，蛋白胨 1g， NaCl 0.5g ，蒸馏水 50ml ， pH7.2。 基本培养基： Vogel 50 ×( 即浓缩 50 倍 )：MgSO 4 7H· 2O 10 g ，柠檬酸 100 g ，NaNH4HPO4 4H· 2 O 175g, K2 HPO4 2H· 2O 599.88 g (K 2 HPO4 3H· 2O 656.319 g), 水 600ml 。 使药品溶解后再定容至 1000ml 。（配好后，放入冰箱保存备用） 。 基本固体培养基： 50 × 2ml ，葡萄糖 2g，蒸馏水 98ml ，琼脂 2g ，PH7.0 ，110℃灭菌 20min 无 N 基本液体培养基： K HPO 0.7g ；KH PO 0.3g; 柠檬酸钠 3H· O 0.5g ；MgSO 7H· O 0.01g; 葡萄糖 2g, 蒸馏水 2 4 2 4 2 4 2 100ml，pH7.0 ， 110℃灭菌 20min 2N 基本培养基： K2 HPO4 0.7g ；KH2 PO4 0.3g; 柠檬酸钠 3H· 2O 0.5g ；MgSO 4 ·7H2O 0.01g; (NH