《ESI的工作原理》介绍.pdfVIP

ESI 的工作原理是 ：内衬弹性石英管的不锈钢毛细管（内径约 0.1 mm ）被加以 3 ～5 kV 的正电压，与相距约 1 cm 接地的反电极 形成强静电场。 被分析的样品溶液从毛细管流出时在电场作用和辅 助气流的作用下形成高电荷的雾状小液滴；在加热的气体作用下， 液滴因溶剂的挥发逐渐缩小，其表面上的电荷密度不断增大。当电 荷之间的排斥力足以克服表面 X 力时，液滴发生裂分，产生带电的 更小微滴；这些液滴中溶剂再蒸发，此过程不断重复，直到液滴变 得足够小、表面电荷形成的电场足够强，最终把样品离子从液滴中 解析出来，形成的样品离子通过锥孔、聚焦透镜进入质谱仪分析器 后被检测。 基质辅助激光解吸电离 (Matrix-assist laser desorption/ionizatin, MALDI) 通过激光束与固体样品分子的作用是其产生分子离子和具有结构 信息的碎片；所研究的是结构较为复杂、不易气化的大分子。 采用固体基质以分散被分析样品是 MALDI 技术的主要特色和创新 之处。基质的主要作用是作为把能量从激光束传递给样品的中间 体。此外，大量过量的基质（基质：样品 =10 000：1）使样品得以 有效分散，从而减少被分析样品分子间的相互作用。 基质的选择主要取决于所采用的激光波长，其次是被分析对象的 性质。 TOF-- 开始时，所有离子都在一起。小的离子移动的快，大的 离子移动的慢。根据到达检测器时间的不同，而检测出不同质 量的离子。可以采用两级加速或反射式提高仪器的分辨率 二维核磁共振谱： 是有两个时间变量， 经两次傅利叶变换得到的两个独立的 频率变量的谱图。一般用第二个时间变量 t2 表示采样时间，第一 个时间变量 t 1 那么是与 t2 无关的独立变量， 是脉冲序列中的某一 个变化的时间间隔。 预备期 (preparation period) ：是一个较长的时期，它使实验前体系 能回复到平衡状态。 演化期 (evolution period, t 1) ：在 t 1 开始时由一个或几个脉冲使体 系激发，使之处于非平衡状态。 t 1 是变化的。 混合期 (mixing period, t m) ：建立信号检出的条件。 混合期有可能不 存在。 检测期 (detection period, t 2 )：以通常方式检出 FID信号。 二维 1 1 H- H 核磁共振基本实验： COSY:建立 a.a.残基内标量耦合 1H 核自旋 间的化学位移关联 1H 之间通过二键或者三键形成交叉峰 TOCSY:建立 a.a.残基内 1 H 核自旋 间的化学位移全关联 1H 之间通过接力传递跨键产生交叉峰 NOESY:建立 a.a.残基内或者残基之间，偶極耦合 1H 之间的 NOE相关 两个 1H 之间空间距离小于或者等于 5? 时，产生 NOE交叉 峰 ? 氨基酸序列 指认 在指纹区 (fingerprint region) 作序列识别 (sequential assignment ) 是有 方向性的 , 即由横向路径到纵向路径 (1H i →1HNi+1) 除了脯氨酸 (Pro)和甘氨酸 (Gly)，每个氨基酸残基都各包含一个 1HN 和 1H 基本规那么为 : (1) 由 COSY交叉峰横向引直线，找出在此线上的某一 NOESY交叉 峰。 该 NOE