《实验菌种分离》课件.ppt

精选PPT 实验二 食用菌母种分离 一、实验目标： 1、掌握组织分离法制备母种的方法。 2、掌握组织分离接种技术。 3、会使用超净工作台和培养箱。 二、实验原理： 组织分离法是利用子实体组织来分离获得纯培养菌丝的方法。 是一种无性繁殖，双亲的染色体没有经过重组，因此组织分离基本上可保持亲本的生物学特性。 三、仪器设备与材料 PDA斜面培养基、解剖刀、镊子、超净工作台、无菌室、酒精灯、培养箱。 香菇 四、制种程序 1、接种工具 枪 匙 钩 铲 镊 耙 针 环 接种 五、菌种生产常用的设备和方法 固体菌种接种枪 液体菌种接种枪 2、接种设备 （1）接种室 （2）接种箱 （3）超净工作台 3、常用的消毒设备： （1）70%酒精：一般用于手、种菇表面消毒； （2）0.1%升汞：常用于玻璃器皿、非金属器械及种菇表面消毒； （3）0.1%KMnO4：一般用于用具、器皿消毒； 4、菌种培养没备 （1）培养箱培养少量菌种的恒温电器（20~40℃） （2）培养室 六、菌种分离的方法 菌种分离：将有价值的子实体的局部组织、孢子或基内菌丝移接到斜面试管培养基上，获得纯培养菌丝的操作称为菌种分离。 必备 特点 简便，易成功 保持原菌种性状 重复多易退化 不适于耳类 1、组织分离：采用食用菌子实体或菌核、菌索的任何一部分组织培养成纯菌丝体的方法。 组织 PDA 次生菌丝 培养 2、木腐菌基内菌丝分离 ①把分离用菇木的部分或全部的表面在火焰上轻燎。 ②取小刀在火焰上灭菌，对准菇木上菇柄的着生位置切成两半。 ③确定欲分离菌丝在菇木上的位置，再次用火焰灭菌过的小刀，在欲分离部位刻划数个井字。 ④用火焰灭过菌的接种钩，钩取一小块木屑移接于斜面培养基。 ⑤接种后将试管置于25~27℃下培养，促使其恢复。近风干的种木内菌丝常处于休眠状态。 3、孢子分离孢子分离主要是指利用子实体上产生的成熟有性孢子分离培养获得纯菌种的方法。分为多孢分离与单孢分离两种。 孢子特点 菌龄小生命力强变异率高 （1）种菇 消毒 菌柄去2/3 苞被 有：75%酒精棉球擦 0.25%新洁尔灭浸2~3min无菌纱布吸干表面水分 无 （2）采收孢子 整菇插种法 种菇插在孢子收集器中使孢子散落于培养皿内的方法 用前灭菌 25℃、24h现孢子粉取出分离材料培养皿盖严 ①钩悬法 生产上采集木耳、银耳的孢子常采用此法。 25℃、24h现孢子粉取出分离材料 ②孢子印法 取成熟的伞菌或胶质的子实体，经表面消毒，切去菌柄，菌褶向下，放置于灭过菌的有色纸上，用通气钟罩上，静置一天，孢子落在纸上，形成孢子印，再从中挑取少量孢子转入试管培养基上培养。 接种孢子 用接种环蘸孢子液或孢子粉涂布于平板上 七、菌种质量的鉴定 形态特征、生理特性、栽培性状、经济效益等 鉴定项目 、 一般从菌种的纯度、长势、颜色、菌龄、均匀度和出菇快慢等6个方面进行鉴定。 退化母种 好母种 出菇试验 栽培 出菇快产量高品质好抗逆性强 菌种种类 品种名称 菌种级别 代 时 生产厂家 接种日期 用于生产 * * 菌丝的培养时间不能太短，