兽药残留分析.pptVIP

1.微生物抑制法 微生物法是一种传统的测定四环素类化合物和其他抗生素的分析方法。 测定原理：是根据抗生素对其敏感的特定微生物的生长抑制作用 ,通过抑菌圈的大小来进行样品中抗微生物药物残留的判断(测定抑菌圈直径，样品抑菌圈直径小于阳性对照抑菌圈直径判定为阴性，否则判定为阳性)。 第三十一页，共53页 蜡状芽抱杆菌 ATCC 11778 是一种经典的用于分析四环素类的微生物，其对金霉素的灵敏度为 0.005mg / L ，对四环素和土霉素的灵敏度为 0.025mg / L ，对二甲胺四环素的灵敏度为 0.001~0.002mg / L 。 相对于其他分析方法，微生物抑制法操作简便、价格低廉、不需要精密仪器和复杂的样品前处理过程，因而适合大量样品的筛选。 微生物抑制法的最大缺点是不能区分具体的四环素种类，因此也难以进行定量检测。 第三十二页，共53页 2.酶联免疫法 间接酶联免疫法可用来检测牛奶中的四环素类抗生素。 四环素-牛血清白蛋白共轭物用于抗体制备，同源的四环素- β -酪蛋白共轭物作为包埋试剂，而羊抗兔 IgG-辣根过氧化物酶作为第二抗体。 牛奶样品经离心脱脂，采用磷酸盐缓冲液至少以 1 :30 的比例进行稀释后，直接采用酶联免疫法进行测定，检测限可达 5 ug / kg 。 第三十三页，共53页 当采用商业化试剂盒检测蜂蜜中的四环素、金霉素和土霉素残留时发现其对金霉素具有强烈的交叉反应活性。试剂盒对四环素和金霉素的检测限均为 15 ug / kg ，但由于所用抗体与土霉素的交叉反应活性较低，对土霉素的检测限为 250 u g / kg ． 实验表明，空白蜂蜜样品经缓冲液稀释 50 倍已足以消除基质干扰。 第三十四页，共53页 3.薄层色谱法 薄层色谱法（ TLC ）又分为正相薄层色谱（ NP-TLC ）和反相薄层色谱（ RP -TLC ）。 正相薄层色谱一般使用纤维素、硅胶、硅藻土等作为吸附层。总体而言，正相薄层色谱是一种简单的、不需特殊设备的分离方法，但在制板时却要花费大量时间消除 TCs 与金属离子的鳌合作用，故通常在吸附剂和溶剂系统中加入 EDTA 以消除金属离子的影响。 第三十五页，共53页 反相薄层色谱分析 TCs 时，溶剂系统中通常加入草酸以消除金属离子的影响．在 RP -TLC 溶剂体系中通常含有磷酸、柠檬酸、酒石酸、 EDTA 等以获得对TCs好的分离效果，但脱尾现象比较严重；在 RP-TLC 溶剂体系中加人草酸后，可以消除 TCs 与金属离子的鳌合作用，减少脱尾现象。 第三十六页，共53页 4.高效液相色谱法 反向 LC 操作简单、方法灵活，已成为包括四环素类抗生素在内的许多药物残留检测的主要分析手段。普遍使用的硅胶基反向键合固定相表面存在残存的硅醇基或金属离子（如 Fe 3 ＋，A1 3 + ) ，而四环素类抗生素易与金属离子鳌合，反向柱残存的硅醇基与四环素类抗生素可以通过氢键或离子交换作用，因此导致色谱峰拖尾，保留值不稳定或过长，出现峰形异常和分离度下降。 第三十七页，共53页 为避免形成金属鳌合物和在反向 LC 色谱柱上的吸附，在反向 LC 中，优化流动相的组成是四环素类抗生素残留检测的重要方法之一。 通常在流动相中加入酸（如磷酸、草酸、柠檬酸、酒石酸、 EDTA 等）、有机改性剂（甲醇、乙睛等）、离子对试剂掩蔽剂等，并以加草酸为多数。 第三十八页，共53页 阳江职业技术学院 生命科学与技术系 农兽药残留检测 第一页，共53页 一、兽药定义及兽药残留来源 （一）兽药定义 1.兽药 是指用于预防、治疗、诊断动物疾病或者有目的地调节动物生理机能的物质（含药物饲料添加剂），主要包括：血清制品、疫苗、诊断制品、中药材、中成药，化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品、外用杀虫剂、消毒剂等。 第二页，共53页 在我国，鱼药、蜂药、蚕药也列入兽药管理。 2.兽药残留 对食品动物用药后，动物产品的任何食用部分中的原型药物或/和其代谢产物，包括与兽药有关的杂质的残留。 第三页，共53页 （二）兽药残留来源 现代养殖业日益趋向于规模化、集约化，不可避免地带来了大量的疫病问题，为了提高饲料报酬和满足人们对动物性食品的需要，需要大量使用饲料药物添加剂，这已成为保障我国畜牧业发展不可少的一环。 第四页，共53页 目前，造成我国兽药残留的原因，大致有如下； 1.非法使用违禁药物 ?滥用己烯雌酚给鸡催肥 ； 盐酸克仑特罗（又叫瘦肉精 ）； 在饲料中添加避孕药、雌性激素养黄鳝、甲鱼 ； 第五页，共53页 2.不遵守休药期规定 兽药用于防病或治病是有疗程规定的，有病的动物也不可能无休止地吃药，特别是药物饲料添加剂