优秀医学课件10PCR试剂与耗材选择及质检 - 刘晓春.pptx

PCR试剂及耗材的验证与 质检;提纲;概念;试剂的验证;什么时候进行性能验证;如何进行试剂的性能验证;（2）最低检测限和定量限的验证;2.线性范围;3.准确度;4.精密度;（3）用于精密度评价四个水平:;5.不同基因型的验证 以HBV为例：;6.分析特异性;用于交叉反应研究的微生物（推荐）;干扰物质，以HBV为例 ①潜在的干扰物质主要包括：内源性物质和常用的治疗 药物如普通IFNα（2a、2b和1b）和聚乙二醇干扰素 α（2a和2b）[PegIFNα（2a和2b）]、拉米夫定 （lamivudine）、阿德福韦酯（adefovir dipivoxil）、恩替卡韦（entecavir）、替比夫定 （telbivudine）等。;用于干扰研究的物质（推荐）;7.溯源性;9. 试剂稳定性的评估;PCR或RT-PCR试剂盒的组成;核酸提取方法;（一）核酸提取方法;（二）核酸扩增所需的原材料;1.寡核苷酸引物和探针;长度：20bp左右，太短有错配，太长易形成稳定的集 合体； G+C比例：45%~55%； 一条引物内或一对引物间不应有5个以上互补核苷酸 ，以免形成引物二聚体； 浓度：过高可致异位引导，非靶序列扩增，过低则影 响PCR产率； 扩增区域：应为病原体基因最保守的区域。;2.扩增缓冲液和dNTP;3.Taq酶以及反转录酶 酶的浓度 浓度过高导致非靶序列扩增；过低影响PCR产量。;4、核酸扩增方法;循环次数：;5. 产物检测;常规 PCR的检测结果;二、影响PCR试剂盒质量的因素;试剂盒的运输和贮存;三、 临床PCR试剂盒的分类 临床PCR试剂盒按其测定靶核酸可分为RNA测定和DNA 测定两大类；;四、临床PCR试剂盒的选用原则;五、临床PCR试剂盒的质检;（一）内、外包装的质检;（二）试剂盒测定性能的质检;表 试剂盒评价四格表;各项指标的计算公式如下：;弱阳性(低拷贝数)质控物进行质检。 在每次临床检测中，同时带上弱阳性质控物与临床标 本一起检测，对判断试剂盒的质量及其稳定性具有重 要的参考价值。;耗材的质检;谢谢聆听