优秀医学课件10临床基因扩增实验室常用仪器设备的使用和维护-刘晓春.pptx

临床基因扩增实验室常用仪器设备的使用和维护广 西 壮 族 自 治 区 人 民 医 院 广 西 壮 族 自 治 区 临 床 检 验 中 心 广 西 医 学 检 验 质 量 控 制 中 心 刘晓春1常用仪器设备试剂准备区加样器、洁净工作台、冰箱标本制备区生物安全柜、高速( 冷冻)离心机、漩涡振荡混旋器、恒温水浴箱（金属浴）、加样器、冰箱扩增区PCR热循环仪（DNA扩增仪）产物分析区天平2主要内容一、PCR仪二、加样器 三、离心机 四、天平五、其他设备…3一、PCR扩增仪发展史分类品牌性能 使用及维护4一、PCR扩增仪---发展史1983年，Kary Mullis 发明PCR技术.1987年，美国加利福尼亚的Cetus公司与美国康州Perkin Elmer（现属于ABI公司）合作，年底推出了世界上第1台 PCR仪----TC-1. 1992年，实时荧光PCR仪： 由Higuchi报道，在普通PCR 仪基础上，配备一个激发和 检测装置1996年，荧光PCR仪市场化5一、PCR扩增仪---分类PCR仪是一个可控的温度快速变化装置用空气作为热传导媒介优点是成本低，整个系统没有液体流动，不用致 冷液，安全程度高。恒温精度可达?1℃ 。缺点是单纯靠外部空气制冷，受环境温度影响大如Roche的LightCycler 、Corbert的RotorGene空气驱动循 环装置加温和降温分别由下部的电阻丝和制冷机控制,加热方式有电热、光、半导体发热等制冷方式有半导体、压缩机等热块的热均匀性达?0.1℃，恒温控制精度?0.5℃如：ABI、Bio-Rad、Cepheid变温金属 块装置67普通PCR技术8实时荧光定量PCR9一、实时荧光PCR扩增仪---品牌性能美国ABI美国Cepheid美国Bio-RadiCycler iQOptionChromo4GeneAmp 5700PRISM 7000 包括7000、7300、 7500、7900HTSmart Cycler可4波长同时检测具有梯度PCR功能，可优化实验条件荧光放大器保证 极高的灵敏度可对加样误差校 正机型小巧四通道荧光升降温快达 10℃/s，检测速 度快，1小时可检 出病原体线性达9个数量级重复性好，可准 确检测处理PCR指 数级扩增数据， 得出高精度重现 的CT值10一、实时荧光PCR扩增仪---品牌性能Roche美国StratageneCorbertRotorGene2000、3000和6000Mx4000Mx3000PMx3005PLightCycler1.0LightCycler2.0LightCycler480引入独特荧光颜色 补偿和软件扩增反应管为毛细 玻璃管，循环速度 快，20～30min完 成30～40个循环线性范围可达10个 数量级4个独立的LED激发光源灵敏度高，重复性 好，线性可达12个 数量级样品间测定有非常 高的精度缺点就是反应孔数 太少扫描式检测，避免 各样品间光程差， 无需内参校正同时检测96个样本， 线性可达10个数量 级11一、实时荧光PCR扩增仪---品牌性能广州达安DA7600上海枫岭FTC3000杭州博日Line gene上海宏石SLAN- 96P厦门安普利FluoScan9700…………12FluorImagerMolecular DynamicsiCyclerBioRadABI 7300FluorTrackerStratageneLightCyclerRoche13如何选择？（1）仪器使用的广泛程度：可从国内外使用的广泛程度来判断（2）工作量：工作量大的不选用扩增孔较少的仪器仪器每天使用的次数是有限的，一般不能超过3次（3）耗材的开放性（4）检测通道和荧光染料：不必过分追求多通道或多种染料检测（5）温度梯度功能：科研可考虑（6）软件功能：考虑分析功能，软件操作是否简单明了，易于使用操作14PCR扩增仪—使用1.放置：PCR仪应放在临床基因扩增实验室的第三区。仪器应放置 水平台上，电源电压须与仪器要求电压相一致，并连接可 靠的地线。仪器远离水源、明火及腐蚀性物质。2.环境：工作室温要求：15-25 ℃，通风保证散热。配 备不间断或稳压电源。尤其是半导体升温降温的设备，对 电压稳定性有要求。3.编程：是重要环节，所取文件名要易于识别，设定的 程序定期检查，以防出现错误检测样本的唯一编号与扩增孔对应，并与书面记录对应15PCR扩增仪—使用4、扩增反应管的放置每次实验时，最好能将扩增仪内的孔位全部放置样品 管，若样品管少时可用空管代替，以保证实验的一致性和 重复性反应管与孔壁紧贴空气加热的仪器，样本量少，也要考虑放平衡5、仪器搬动：倾斜角度不易超过15°6、定期校准：内容包括仪器的光学和控温，变温金属块加热装置还需校准 孔