icc免疫细胞化学染色.pdfVIP

原代培养海马细胞神经元的鉴定 将大鼠海马神经元细胞终浓度 （2*10 6 个 /ml ）接种于铺有盖玻片并经多聚赖氨酸包被好 的 6 孔板中，每孔，培养条件同上，培养至第 8 天，用免疫组化法鉴定。 步骤如下： 1.吸弃培养液用 PBS 冲洗 3 遍，冷丙酮固定 10min 。 冲洗 3 遍， 3%H2O2 （30%双氧水和纯甲醇按 1:9 的容积比混合）封闭内源性过氧化物 酶，室温下 10min 。 冲洗 3 遍， %Triton 破膜（溶解细胞膜，细胞核膜细胞器膜上的脂质） 15min ，PBS 洗 3 遍。 %羊血清封闭，室温 10min ，吸弃上清（不洗） 。 一抗 37℃反应 1h （20 μL 的 NSE+1ml 稀释液），设空白对照，以 PBS 代替一抗 洗 3*5min ，二抗 （羊抗兔）室温下 18min ，PBS 洗 3*5min ，SABC 复合物 37℃，18min 。 （二抗标记的 FITC