第四章-工业微生物分离与筛选PPT课件.pptVIP

2021 第四节 有用微生物的筛选 筛选有用微生物是工业生产过程的第一步。 筛选：从自然界某些含有菌群的材料中，用特定的操作程序分离并发现有用的微生物。 一 初筛 二 复筛 三 抗菌谱的测定 2021 （一）初 筛 目的：得到具有潜在应用价值的目的微生物。 初筛：一次或多次从现有菌群中把多数无用的微生物淘汰，把少量有用的微生物筛选出来。 要求： 快速——有预测或预见 敏捷——迅速处理好众多的样品。 经济——得到有广泛目标的有用微生物。 2021 筛选方法 琼脂平板培养基上培养生产出群体后初筛。 1、用pH指示剂检测有无有机酸或胺类。中性麝香草酚蓝:pH＜6.0黄,pH ＞7.6蓝,pH6.0-7.0绿 2、在培养基中加入碳酸钙检测有机酸。可在菌群周围形成清晰的碳酸钙溶解区。 3、在培养基中加入底物检测细胞外酶、酶抑制剂等特定的底物可以与细胞外酶形成显色反应；酶的反应对特定底物形成溶解或沉淀。 2021 LOGO 第四章 工业微生物  分离与筛选 2021 本章内容 含微生物样品的富集培养 含微生物样品的采集 工业微生物的常规分离 目的微生物的筛选 毒性试验及性能鉴定 2021 定方案：首先查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 新菌种分离与筛选的步骤 2021 （一）菌种的来源 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 2021 新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出。 实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。 （二）分离思路 2021 第一节 含微生物样品的采集 一、从土壤中采集 分布：细菌、放线菌、霉菌、酵母、藻类、原生动物 1、土壤特点： 有机质含量和通气状况 5-25cm细菌、放线菌；5-10cm酵母、霉菌 酸碱度和植被状况 2021 地理条件 季节条件：以温度适中，雨量不多的秋 初为好。 2021 二、根据微生物生理生化类型采样 1、根据微生物营养类型采样 自养型、异养性（碳源不同） 2、根据生理特性采样 温度敏感型、氧敏感性、渗透压敏感型、酸碱型等 3.特殊环境下采样：极端微生物 2021 三、采样方式 （1）土样采集 森林、旱地，草地可先掘洞，由土壤下层向上层顺序采集； 用小铲子除去表土，取离地面5-25cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等。为使土样中微生物的数量和类型尽少变化，样品要及时分离。 2021 水田等浸水土壤在不损土层结构的情况下插入圆筒采集。或可取离地面5～15cm处的土。 在采集植物根际土样时，一般是自土壤中慢慢拔出植物根，在无菌水中浸渍约20min，洗去粘附在根上的土壤，然后再用无菌水漂洗下根部残留的土，这部分即为根际土样。 采集工具：样本采集时所需的工具通常 有无菌刮铲、土样采集器、镊子、解剖 刀、手套、无菌小塑料袋和塑料瓶等。 2021 （2）植物体采集 采集叶面一般用灭菌的剪刀、打孔器、安全刀片等，由几片新鲜叶片的同一部位切取一小块，并注意不要损伤周围边缘。 选择叶面时应考虑叶位、叶龄、叶片正反面和在一片叶上的取样部位。 采集植物根及根系时，方法与根际土样采集方法相似。采集根系时，一般与根际土样一起保存。 2021 （3）水样采集 水样应收集于100m1干净、灭菌的广口塑料瓶中； 由于表层水中含有泥沙，故在采样时应在较深的静水层中采集水样； 方法：握住采样瓶底浸入水中30-50cm处，然后瓶口朝下打开瓶盖，让水样进入。水样不应装满采样瓶。所有水样都应在24h之内迅速进行检测，或者4℃下贮存。 2021 四、采样的注意事项 采样时应尽可能保持相对无菌； 所采集的样本必须具有某种代表性； 完整地标上样本的种类及采集日期、地点以及采集地点的地理、生态参数等； 应充分考虑采样的季节性和时间因素，因为真正的原地菌群的出现可能是短暂的； 采好的样应及时处理，暂不能处理的也应贮存于4℃下，时间不宜过长。 2021 1、营养成分 2、培养时间、温度、pH 3、抑制杂菌 等一切能提高目的微生物相对生长速度的手段，培养（固体、液体；分批连续）后使