培训课件：食品中蛋白质的测定gb_5009.5-教案资料.pptVIP

其他(qítā)试剂的作用 硫酸铜，氧化汞或硒粉，催化剂，加快反应速度（但为了防止污染通常使用(shǐyòng)硫酸铜，所以有机物全部消化后，出现硫酸铜的兰绿色，还可以作为碱性反应指示剂）。 有的加少量过氧化氢、次氯酸钾作为氧化剂。 50%NaOH的作用 蒸馏时使溶液呈碱性 第二十七页，共41页。 第二步——蒸馏(zhēngliú)： 样液中的硫酸铵在碱性条件下释放出氨，在这操作中。 一是加入氢氧化钠溶液要过量，如果NaOH量加的不够就变成H2S， H2S是强酸，使颜色(yánsè)变红。 二是要防止样液中氨气逸出。 第二十八页，共41页。 第三步——吸收(xīshōu)与滴定： 蒸馏过程中放出的氨可用一定量的标准硫酸或标准盐酸溶液进行氨的吸收，然后再用标准氢氧化钠溶液反滴定过剩的硫酸或盐酸溶液，从而计算出总氮量。（全量） 半微量或微量定氮通常用硼酸溶液吸收后，再用标准盐酸直接滴定，硼酸呈微弱酸性，用酸滴定不影响指示剂变色(biànsè)反应，它有吸收氨的作用。（用硼酸代替H2SO4，这样可省略了反滴定，H2SO4是强酸，要求较严，而硼酸是弱酸，在滴定时，不影响指示剂变色(biànsè)范围，另外硼酸为吸收液浓度在3%以上可将氨完全吸收，为保险起见一般用4%）。 第二十九页，共41页。 滴定 终点 至灰色或蓝紫色 第三十页，共41页。 实验(shíyàn)注意事项 1.样品应是均匀的，若是固体样品应事先研细，液体样要混合均匀。 2.样品放入K氏烧瓶时，不要粘在瓶颈上，万一粘附可用少量(shǎoliàng)水缓慢冲下，以免被检样消化不完全，使结果偏低。 3.消化时，如不容易呈透明溶液，可将K氏烧瓶放冷后，加入30%过氧化氢催化剂2~3ml，促使氧化。 4.在整个消化过程中，不要用强火，保持和缓的沸腾，使火力集中在K氏烧瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失。 5.如硫酸缺少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这时会形成硫酸氢钾，而不与氨作用，样品中脂肪含量过高时或取样量较大时，要添加硫酸量，若如干试样超过5 g 可按每克试样5 m1的比例增加硫酸用量。 第三十一页，共41页。 实验(shíyàn)注意事项 6.蒸馏装置(zhuāngzhì)不能漏气。氨是否完全蒸馏出来，PH试纸检查馏出液是否为碱性。 7.向蒸馏瓶中加入浓碱时，往往出现褐色沉淀。这时由于分解促进剂与加入的硫酸铜反应，生成氢氧化铜，经加热后又分解生成氧化铜的沉淀，有时Cu离子与氨作用生成深兰色的络合物。 8.蒸馏完毕后，应先将冷凝管下端提离液面清洗管口，再蒸1分钟后关掉热源．否则可能造成吸收液倒吸。 第三十二页，共41页。 自动(zìdòng)凯氏定氮仪法 称取固体试样0.2 g-2 g、半固体试样2 g-5 g 或液体试样10 g-25 g（约相当于30 mg-40 mg 氮），精确至0.001 g。按照(ànzhào)仪器说明书的要求进行检测。 大多数实验室用FOSS的自动定氮仪，准确度、稳定性好。样品消化时可低温烘干后进行，不起大泡飞溅。 第三十三页，共41页。 * 自动(zìdòng)凯氏定氮仪法 在凯氏定氮法的基础上发展起来的自动凯氏定氮仪法，具有安全、高效、准确(zhǔnquè)的优点。 仪器： 自动蒸馏(zhēngliú)装置 消化炉 第三十四页，共41页。 凯氏定氮仪设备(shèbèi)操作sop 1、确保(quèbǎo)仪器运行正常、管道内部干净、管道及其连接口密封性好 2、准备好吸收液（20ml 2%硼酸 +几滴混合指示剂）并做好标记 3、检查碱溶液及纯化水桶是否与仪器连接好，放入盛装消化好样品的消化瓶，放入盛装吸收液的锥形瓶并保证管口插入液面下。 4、设置并启动程序 第三十五页，共41页。 程序(chéngxù)设置 步骤 加碱或加水 时间 蒸馏 时间 C0（样品检测) E0（加碱） 5s E0 4min C1（样品间清洗） E1 0s E1 2min C2（试验结束后第一次清洗） E2（加水） 20s E2 0min C3（试验结束后第二次清洗） E3（加水） 10s E3 4min 第三十六页，共41页。 凯氏定氮蒸馏(zhēngliú)仪结构图（常量） 第三十七页，共41页。 凯氏定氮蒸馏(zhēngliú)仪示意图 蛋白质+ H2SO4 → （NH4） 2SO4 （NH4）2SO4+NaOH=NH4OH+Na2SO4 NH4OH → H2O + NH3 → NH4OH NH3+(标准(biāozhǔn)) H2SO4→（NH