包涵体提取PPT课件.ppt

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三、 基因重组蛋白包涵体的分离和复性;;;;;包涵体直径约0.5-1μm,具有很高的密度(约1.3 mg/ml),相差显微镜下有折光性,呈非水溶性,只溶于高浓度变性剂如尿素、盐酸胍等。 ;包涵体加工流程;包涵体的洗涤;包涵体的溶解;蛋白质复性机理;一般说来,在优化的条件下,大多数蛋白质体外复性效率在20%左右 ;复性常用方法; 2.透析复性:好处是不增加体积,通过逐渐降低外透液浓度来控制变性剂去除速度,速度慢,不适合大规模操作。 3. 超滤复性:选择合适载留分子量的膜,允许变性???通过膜而蛋白质通不过。缺点是不适合样品量较少的情况,且有些蛋白可能在超滤过程中不可逆的变性(蛋白聚集于膜上)。;4. 色谱复性:兼具分离。 4.1 凝胶过滤复性: 该法可以起到一定的抑制凝集作用,并且在凝胶过滤中脲等变性剂脱除得相对较慢,对有些蛋白质的复性有利。;4.2吸附型层析复性: 原理是层析柱平衡后,将变性蛋白上样并吸附在凝胶介质上,然后用清洗缓冲液洗掉未吸附的变性剂和杂蛋白,最后用复性缓冲液将吸附的蛋白洗脱下来,在洗脱过程中完成复性。;四、重组蛋白质的鉴定;1 蛋白质含量的测定;2. 纯度鉴定;色谱纯;3.蛋白质鉴定;3.1蛋白质分子质量及等电点的测定;3.2氨基酸组成及顺序分析;各类氨基酸自动测序仪;3.3 空间结构分析;3.4 免疫印迹鉴定;原核细菌表达的重组蛋白产物的质量检测项目与方法;

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